制备大鼠幼鼠脑的鼻周皮层-海马切片

取一只刚收获的大鼠幼崽脑组织，背侧朝上，置于含有冷缓冲液的培养皿中。

打开脑半球并移除覆盖海马体的组织。

将半球切开，使其包含海马和鼻周皮层。

将两个半球的海马体朝上并平行放置在滤纸片上。

将该结构转移至组织切片机中，刀片与半球面垂直。

将半球体切成所需厚度以获得切片，并用冷缓冲液将其转移至培养皿中。

小心分离切片，并进行解剖，以包含结构完整的海马和鼻周皮层区域。

将切片转移至含培养基的多孔板中的膜插件上。

移除切片上多余的缓冲液，并孵育以恢复组织。

更换培养基。这些切片可用于进一步分析。

将脑组织背侧朝上转移至含有5毫升冷GBSS的60毫米培养皿中。将精细镊子插入小脑部位，沿中线插入解剖刀片，小心分开大脑半球。使用短而弯曲的镊子小心去除覆盖在海马体表面的多余组织，避免触碰海马体结构。随后，在每个海马体下方进行剪切。

每次转移一个半球，将海马体朝上并相互平行地放置在滤纸上。将滤纸置于组织切片机上，使半球与刀片垂直，将半球切成350微米厚的切片。将切好的组织转移到含有5毫升冷GBSS的新培养皿中，并使用圆头电极小心分离切片。

仅保留海马体和鼻周皮层结构完整的样本，使用刮勺和圆头电极将最多四个完整脑片分别放置于六孔板中相应数量的孔插件上，每孔含有 1.1 毫升培养基。

使用 P20 移液器吸除每个切片周围多余的解剖液。将培养板放入细胞培养箱中。每两到三天更换一次培养基。用镊子轻轻提起插入物，吸出对应孔中的培养基，然后将插入物放回原位。使用 P1000 移液器向每个孔中加入 1 毫升新鲜的 37 摄氏度培养基。