使用电压敏感染料染色的脑片中神经元活动的光学记录

取一块固定的小鼠脑切片，该切片经电压敏感性染料（VSD）染色，这类荧光分子可嵌入神经元膜中，并对膜电位变化产生响应。

将切片放入记录室中。

安装接地电极以提供基准电压参考。

接下来，将刺激电极和记录电极放置在脑片上。

施加电脉冲。

脉冲刺激神经元，触发电压门控钠通道开放和钠离子内流，导致膜电位发生变化。

这会引发动作电位，由记录电极检测到，并改变电压敏感染料（VSD）的荧光特性。

用特定波长的光照射脑切片，以激发电压敏感染料（VSD）并触发荧光发射。

刺激后，钠通道关闭，而电压门控钾通道打开，促进钾离子外流。

这会再次改变膜电位，从而改变电压感应结构域（VSD）的荧光信号。

实时记录荧光信号，以直观显示神经元活动。

开始此操作步骤时，打开放大器、计算机和相机系统，并启动软件。将 aCSF 倒入一个 50 毫升的离心管中，并用碳氧混合气体（carbogen）进行鼓泡。使用蠕动泵循环 aCSF，调节流速至大约每分钟 1 毫升。

然后，调节吸液移液管的高度，使实验腔室内的液面始终保持恒定。将接地电极放入腔室内。随后，用少量人工脑脊液（aCSF）填充玻璃电极，并将其放入电极夹持器中。将夹持器固定到操纵器的杆上。

使用放大器确保电极电阻约为1兆欧。在记录过程中，将切片从保湿室转移至实验腔室。将环的边缘牢固地压入硅胶O形环中。注意不要损坏膜或实验腔室的底部。

在显微镜下，将刺激电极和场电位记录电极的尖端放置在脑片上。通过施加刺激来检测诱发出的反应。确认光学记录系统的视野覆盖了正确的神经环路。

接下来，将激发光强度调节至相机最大容量的约70%至80%。使用荧光光源，通过采集系统调节焦距。然后开始录像，并在采集完成后使用图像采集软件分析数据。