使用流式细胞术测量神经元中的多个线粒体参数

取固定并通透化的神经元置于离心管中。

加入封闭缓冲液以防止非特异性抗体结合。

离心悬浮液并弃去上清液。然后，将神经元重悬于缓冲液中。

将悬浮液等量转移至含有未标记和荧光染料标记的一抗的离心管中。

孵育，使抗体特异性结合神经元内的线粒体呼吸链或MRC复合物亚基、线粒体DNA相关蛋白以及线粒体外膜蛋白。

去除未结合的抗体。

使用与未标记的一抗结合的荧光标记二抗进行孵育。

离心混合物并弃去上清液。

用缓冲液重悬神经元，并转移至微量离心管中。

通过流式细胞术检测标记神经元上的荧光信号，以反映MRC复合物亚基的表达水平及线粒体DNA相对含量的测定。

用1毫升封闭缓冲液封闭样品，并如所示通过离心法用PBS洗涤细胞。为检测不同的线粒体复合物及亚基，将细胞与文中所述相应的初级抗体在30分钟内孵育。用PBS洗涤细胞一次后，将细胞与二抗孵育30分钟。

孵育结束后，按照所示方法用 PBS 洗涤细胞并将细胞重悬于 PBS 中。将细胞悬液转移至 1.5 毫升微量离心管中，置于冰上并避光保存。随后，使用流式细胞仪分析细胞，通过 530/30 带通滤光片检测信号并进行过滤。