JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:08 Min. • September 26th, 2025
Nehmen Sie eine Gradienten-Schwarmplatte mit doppellagigem Agar. Die untere Schicht, die einen Inhibitor enthält, wurde gegossen, um einen Gradienten des Inhibitors zu erzeugen.
Die Platte enthält isometrisch angeordnete Vertiefungen, um ausreichend Platz für Bakterienschwärme oder kollektive Migration zu bieten und Schwarmüberlappungen zu verhindern.
Beimpfen Sie die Vertiefungen mit einer Bakterienkultur und inkubieren Sie die Platte.
Bei niedrigen Inhibitorkonzentrationen koordinieren Bakterien ihre Flagellenbewegung und initiieren so eine kollektive Wanderung oder ein Schwärmen.
Bei hohen Inhibitorkonzentrationen unterdrückt der Inhibitor die Expression von Flagellen-verwandten Genen.
Dies führt zu einer eingeschränkten Bewegung der Geißel, was zu einer eingeschränkten Motilität des Schwarms führt.
Bilden Sie die Platte in regelmäßigen Abständen unter weißem Licht ab, um das Schwarmmuster einzufangen.
Passen Sie während der Aufnahme die Belichtungszeit an, um die Helligkeit der Schwärme zu erhöhen.
Ändern Sie die Schwellenwerteinstellungen, um Interferenzen mit dem Hintergrundlicht zu minimieren und den Kontrast zu erhöhen.
Speichern Sie das Bild für eine spätere Analyse der Wirkung der Inhibitorkonzentration auf das Bakterienschwärmen.
Geben Sie 80 Mikroliter der Wachstumskultur über Nacht in jede Vertiefung. Nehmen Sie die Schwarmplatten alle 12 Stunden nacheinander aus dem Inkubator und legen Sie sie in das Gel-Bildgebungssystem.
Wählen Sie den Gel-Imaging-Modus, belichten Sie die Schwarmplatte mit weißem Licht und passen Sie die Brennweite an, um eine klare Sicht auf die Schwärme zu erhalten. Verbessern Sie die Helligkeit der Schwärme für eine präzise Beobachtung, indem Sie die Belichtungszeit auf 300 Millisekunden einstellen. Passen Sie den Schwellenwert an, um Interferenzen durch das Hintergrundlicht zu minimieren.
Speichern Sie die Bilddatei für die weitere Analyse.