Visualisierung einzelliger bakterieller Interaktionen

Beginnen Sie mit einer gläsernen Deckglasschale, die mit einer Kokultur aus fluoreszenzmarkierten beweglichen Bakterien und unmarkierten nicht-beweglichen Bakterien besiedelt ist.

Nehmen Sie die Schale, die ein mit Nährstoffen angereichertes Agarose-Pad enthält, und entfernen Sie vorsichtig die umgebende Silikonform.

Kippen Sie die Schüssel und schieben Sie sie mit einem gebogenen Spatel unter den Rand des Pads. Legen Sie es dann auf den Deckel einer Petriplatte.

Übertragen Sie das Pad mit der Unterseite nach unten in die Schale mit den Bakterienzellen, um einen gleichmäßigen Kontakt mit der Bakterienschicht zu gewährleisten.

Drücken Sie vorsichtig auf das Pad, um Luftblasen zu entfernen.

Legen Sie die benetzten Tücher um den Rand der Schüssel, um die Feuchtigkeit zu erhalten.

Verfolgen Sie unter einem inversen Mikroskop das bakterielle Verhalten über einen bestimmten Zeitraum.

Während die Bakterien wachsen, setzen die unbeweglichen Bakterien chemische Lockstoffe frei. Die beweglichen Bakterien nehmen diese Signale wahr und bewegen sich auf die unbeweglichen Bakterienkolonien zu.

Im Laufe der Zeit sammeln sich bewegliche Bakterien an und dringen in nicht-bewegliche Bakterienkolonien ein, was bakterielle Wechselwirkungen bestätigt.

Sobald die Pads trocken sind, pipettieren Sie einen Mikroliter Co-Kultur gleichmäßig über den Boden einer vorgewärmten sterilen 35-Millimeter-Glasdeckglasschale.

Entferne den Silikonausschnitt mit einer sterilen Pinzette aus der Agaroseform, kippe ihn zur Seite und schiebe einen leicht gebogenen Spachtel unter den Rand des Agarose-Pads, um ihn auf einen sterilen Petriplattendeckel fallen zu lassen.

Übertragen Sie das Pad mit der Unterseite nach unten mit den Bakterienzellen in die Schale, indem Sie einen um 90 Grad abgewinkelten Spatel unter das Pad schieben und auf den geimpften Deckbelag legen. Bringen Sie das Pad mit dem Spatel bündig auf den Bezug und drücken Sie alle Luftblasen vorsichtig heraus.

Entfernen Sie überschüssige Feuchtigkeit aus dem feuchten Tuch und legen Sie es um den Rand der Schüssel, wobei Sie darauf achten, dass es das Pad nicht berührt. Die Probe ist nun bereit für die Bildgebung.