Bewertung der Wirkung nützlicher Bakterien auf die mikrobielle Translokation des Darms bei hitzegestressten Ratten

Beginnen Sie mit einer Versuchsratte, die mit nützlichen Bakterien vorbehandelt wurde, und einer Kontrollratte, der phosphatgepufferte Kochsalzlösung oder PBS verabreicht wurde.

Setzen Sie beide Ratten hohen Temperaturen aus, um physiologischen Stress zu erzeugen.

Bei der Kontrollratte stört Hitzestress die Darmepithelbarriere, so dass sich aus dem Darm stammende Bakterien verlagern und in innere Organe ausbreiten können.

Bei Versuchsratten setzen nützliche Bakterien jedoch Signalmoleküle frei, die Epithelverbindungen erhalten und die bakterielle Translokation reduzieren.

Entnehmen Sie Röhrchen mit den entnommenen Leberproben jeder Ratte.

Fügen Sie PBS hinzu und homogenisieren Sie die Proben, um Bakterien in den Puffer freizusetzen.

Verteilen Sie das verdünnte Homogenat auf nährstoffreiche Agarplatten.

Inkubieren Sie die Platten, damit sich Bakterienkolonien bilden können. Zählen Sie dann die Völker.

Höhere Koloniezahlen in der Kontrollprobe deuten auf eine Störung der Darmbarriere und eine bakterielle Translokation hin.

Im Gegensatz dazu deuten weniger Kolonien in der Versuchsprobe auf die Wirkung nützlicher Bakterien bei der Begrenzung der bakteriellen Translokation in den Darm hin.

Nach zweitägiger Behandlung von Ratten durch orale Sonde mit B.subtilis BSB3 oder PBS, anschließender Unterteilung der Tiere und Messung ihrer Temperatur halten Ratten der Gruppen eins und zwei 25 Minuten lang bei Raumtemperatur. Tiere der Gruppen drei und vier werden 25 Minuten lang bei 45 Grad Celsius und 55 % relativer Luftfeuchtigkeit in eine Klimakammer gebracht.

Dann, nach dem Einschläfern der Tiere, der Entnahme des Rumpfblutes und der Isolierung von Organen gemäß dem Textprotokoll, fügen Sie steriles PBS zu jedem Röhrchen hinzu, um eine Verdünnung der Probe von einem bis zehn Gewicht pro Volumen zu erhalten, und verwenden Sie einen sterilen Glasgewebehomogenisator, um homogene Gewebesuspensionen zu erzeugen.

Verwenden Sie anschließend steriles PBS, um serielle Verdünnungen jeder Probe vorzunehmen. Dann werden 0,1 Milliliter aller Verdünnungen auf die Oberfläche von MacConkey's und 5% Blutagar und Brucella Blutagar mit Hämin und Vitamin K1 aufgetragen. Verwenden Sie nach dem Inkubieren der Platten einen Koloniezähler, um die Kolonien auf jeder Plattengruppe zu zählen.