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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:07 Min. • October 30th, 2025
Getrennte Proben von lebenden und toten Microcystis aeruginosa-Zellen entnehmen.
Mischen Sie die Proben, um eine kombinierte Grundgesamtheit zu erhalten.
Microcystis enthält Phycocyanin, ein autofluoreszierendes Pigment, das in lebenden Zellen intakt bleibt, aber in toten Zellen abgebaut wird.
Wirbeln Sie die Probe auf, um die Klumpen aufzubrechen und eine gleichmäßige, einzellige Suspension zu erzeugen.
Fügen Sie eine zellmembranundurchlässige, Nukleinsäure-bindende Fluoreszenzsonde hinzu und inkubieren Sie die Probe im Dunkeln, um Photobleiche zu verhindern.
Die Sonde dringt selektiv durch die geschädigten Membranen in die abgestorbenen Zellen ein und bindet an die intrazelluläre DNA.
Lassen Sie die Probe durch ein Durchflusszytometer laufen, um die Phycocyanin-Autofluoreszenz und die Fluoreszenz der Nukleinsäuresonde mit geeigneten Anregungswellenlängenlasern zu messen.
Die lebenden Zellen emittieren eine starke Phycocyanin-Autofluoreszenz, zeigen aber kein Sondensignal.
Im Gegensatz dazu weisen tote Zellen eine verminderte Pigmentemission und eine erhöhte Sondenfluoreszenz auf, was eine Membranschädigung bestätigt.
Dies ermöglicht die Identifizierung der pigmentreichen lebenden Zellen von den abgestorbenen Zellen.
Um die Aufnahme der molekularen Sondenzellen zu optimieren, wird die Hälfte der zuvor vorbereiteten Monokultur den geeigneten Bedingungen für die Erzeugung einer Totkontrolle ausgesetzt. Überprüfen Sie die Schwankungen in der Mikroumgebung der Probe, um den Tod der Kultur zu bestätigen. Und dann disaggregieren Sie die Kolonieformation, wie gerade gezeigt.
Wählen Sie als Nächstes einen 488-Nanometer-Laser neben einem Detektor aus, der die Fluoreszenz der grünen und orangefarbenen Nukleinsäuresonden aufzeichnen kann. Und der 640-Nanometer-Laser, um die Phycocyanin-Signale durch ihre jeweiligen Detektoren aufzuzeichnen.