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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:56 Min. • February 2nd, 2026
Beginnen Sie mit Blasenepithelzellen, die von einer Mausblase abgeschabt wurden, die mit fluoreszenzmarkiertem uropathogenem E. coli infiziert ist.
Während der Infektion dringen diese Bakterien in Epithelzellen ein und bilden intrazelluläre Bakteriengemeinschaften, sogenannte IBCs – biofilmähnliche Strukturen, die sie vor der Immunabwehr des Wirts schützen.
Unter einem Seziermikroskop werden IBCs als große fluoreszierende Aggregate identifiziert, die in einzelnen Epithelzellen eingeschlossen sind.
Bauen Sie ein Mund-Mikropipettiersystem mit einer gezogenen Glaskapillare zusammen, die mit einer Aspirationspipette verbunden ist, um einzelne IBC-haltige Epithelzellen zu isolieren.
Tauchen Sie die Kapillarspitze kurz in PBS, um die kapillargetriebene Flüssigkeitsaufnahme zu reduzieren.
Positioniere die Kapillare in der Nähe der ausgewählten fluoreszierenden Epithelzelle und sauge sanft ab, um eine einzelne IBC-haltige Zelle anzuziehen, wobei uninfizierte Zellen und extrazelluläre Bakterien vermieden werden.
Stoßen Sie die Zelle mit leichtem Überdruck in ein steriles Mikrozentrifugenrohr aus, wodurch die bakterielle Lebensfähigkeit erhalten bleibt.
Diese Methode ermöglicht die Isolierung von Epithelzellen, die IBCs beherbergen, für Einzelzellanalyse.
Wenn alle Zellen abgekratzt sind, führen Sie das nicht gezogene Ende einer gezogenen Glaskapillare in den Gummistopfen eines Aspiratorrohrs ein und passen Sie das schmale Ende einer 1-Milliliter-Pipettenspitze fest in das andere offene Ende des Rohrs.
Klemmen Sie das schmale Ende einer 2-Milliliter-Aspirationspipette fest in das offene, breitere Ende der 1-Milliliter-Pipettenspitze und legen Sie die abgekratzte Zellsuspension unter ein Seziermikroskop. Mit einer 20- bis 40-fachen Vergrößerung werden die IBCs als große fluoreszierende Aggregate identifiziert und das feine Ende der Glaskapillare für 1 Sekunde in ein frisches PBS-Rohr getaucht, um die Aufnahme unerwünschtes Volumens durch Kapillarwirkung zu verringern.
Wenn ein interessantes IBC gefunden wurde, führt man langsam das offene Ende des Kapillarrohrs zum IBC und übt eine sehr geringe Saugkraft auf die Aspirationspipette aus, um das IBC in die Glaskapillare zu führen. Dann wird die Kapillare in ein leeres 1,5-Milliliter-Zentrifugenrohr gefasst und ein leichter Überdruck ausgeübt, um den Tröpfchen und das IBC in das Rohr auszustoßen.