0 Aufrufe • 3:02 Min. • July 8th, 2025
Die Eizelle des Schweins ist von einem kompakten, mehrschichtigen Cluster von Kumuluszellen umgeben, die den Kumulus-Oozyten-Komplex (COC) bilden. Die innersten Kumuluszellen verlängern die Fortsätze durch die Zona pellucida der Eizelle. Bei diesen Prozessen entwickeln sich sowohl Lücken- als auch Zwischenübergänge, die den interzellulären Transfer von Molekülen zwischen der Eizelle und den umgebenden Kumuluszellen unterstützen. Diese bidirektionalen Wechselwirkungen erhalten die Lebensfähigkeit von KOK, was eine entscheidende Determinante für eine erfolgreiche In-vitro-Fertilisation oder IVF ist.
Um KOK zu isolieren, tauchen Sie einige Eierstockfollikel des Schweins in eine Petrischale, in der sich das Reifungsmedium befindet. Dieses Medium enthält Hormone, die für die In-vitro-Reifung der Eizellen notwendig sind. Präparieren Sie Eierstockfollikel, um KOK und Follikelflüssigkeit in die Petrischale freizusetzen. Diese Flüssigkeit ergänzt das Reifungsmedium mit zusätzlichen Nährstoffen und Hormonen, die für die Eizellkompetenz unerlässlich sind.
Aspirieren Sie den freigesetzten follikulären Inhalt und übertragen Sie ihn in eine andere Petrischale. Visualisieren Sie die Platte unter einem Mikroskop, um unbeschädigte KOKs zu identifizieren, die eine normale Morphologie aufweisen, bestehend aus runden Eizellen mit mäßig granuliertem Zytoplasma und einem intakten Polkörper, der von Kumuluszellen umgeben ist.
Isolieren Sie ein einzelnes COC und übertragen Sie es in die mit dem Reifungsmedium enthaltende zentrale Vertiefung einer IVF-Platte. Lagern Sie die Platte bis zur weiteren Verwendung bei optimaler Temperatur.
Um die KOK aus mittelgroßen Follikeln zu isolieren, geben Sie zwei bis drei Eierstöcke in eine sterile 10-cm-Petrischale, die mit HM gefüllt ist. Schneiden Sie vorsichtig die Oberfläche der hervorstehenden Eierstockfollikel mit einer sterilen chirurgischen # 15-Klinge ab, wodurch die Follikelflüssigkeit und die KOK in die Petrischale fließen. Aspirieren Sie den follikulären Inhalt mit einer 28-Gauge-Nadel, die an einer Einwegspritze befestigt ist, und überführen Sie ihn in eine andere Petrischale.
Um die IVF-Petrischalen zuzubereiten, geben Sie 1 Milliliter HM in die zentralen Vertiefungen und geben Sie drei bis vier Tropfen HM in die äußeren Ringe. Bewegen Sie dann mit einer Mikropipette aus Polycarbonat die unbeschädigten KOKs zu HM-Tropfen in den äußeren Ringen und spülen Sie sie drei- bis viermal kurz aus. Wenn Sie fertig sind, geben Sie sie einzeln in die zentrale Vertiefung. Bewahren Sie die IVF-Platten im Inkubator auf.