Eine Methode zur Induktion von Entzündungen der Augenoberfläche in einem Mausmodell

Das okuläre Oberflächensystem besteht aus der Hornhaut, der Bindehaut und einem zugehörigen Drüsennetzwerk. Ein Tränenfilm schützt die Augenoberfläche.

Die Verdunstung der wässrigen Schicht des Tränenfilms wird durch eine Lipidschicht gehemmt, die von den Meibom-Drüsen abgesondert wird. Eine Entzündung der Augenoberfläche behindert die Lipidsekretion, was zu einer Erkrankung des trockenen Auges führt.

Um eine Entzündung der Augenoberfläche in einem Mausmodell zu induzieren, nehmen Sie eine Maus und injizieren Sie intraperitoneal eine Immunogenlösung. Das Immunogen aktiviert T-Helferzellen oder Th-Zellen, um eine Immunantwort auszulösen. Die aktivierten Zellen breiten sich durch den systemischen Kreislauf auf die Augen aus.

Führen Sie nach der Inkubation eine Herausforderung der Augenoberfläche durch, indem Sie das Immunogen auf das Auge auftragen, wodurch eine übertriebene Immunantwort erzeugt wird.

Antigen-präsentierende Zellen präsentieren das Immunogen an die aktivierten Th-Zellen. Die Restimulation der Th-Zellen bewirkt die Freisetzung von Zytokinen und Chemolockstoffen, was zu einer Entzündung der Augenoberfläche führt.

Die Chemoattraktoren bewirken einen Zustrom von Neutrophilen. Die Bindung an die Zytokine aktiviert eine Signalkaskade im Inneren der Neutrophilen, wodurch reaktive Sauerstoffspezies oder ROS entstehen. Die erzeugten ROS bewirken die Freisetzung von antimikrobiellen Proteinen aus zytoplasmatischen Granula und die Chromatin-Dekondensation.

Die dekondensierten Chromatinfasern und granulären Proteine bilden eine extrazelluläre netzartige Struktur, die als aggregierte extrazelluläre Falle für Neutrophile oder aggNET bezeichnet wird. Die übermäßige aggNET-Produktion verstopft die Öffnungen der Meibom-Drüsen und verhindert so die Lipidsekretion.

Das Mausmodell der Entzündung der Augenoberfläche ist bereit für die nachgelagerte Analyse.

Um die intraperitoneale Injektion der Immunogenlösung durchzuführen, halten Sie die 7 bis 9 Wochen alte, nicht anästhesierte weibliche Maus C57 Black 6 sanft am Schwanz, während Sie das Käfiggitter greifen. Halten Sie dann die Haut im Rücken- und Nackenbereich fest zwischen Daumen und Zeigefinger und fixieren Sie den Schwanz und die unteren Gliedmaßen zwischen Ring- und kleinem Finger an der Handfläche. Halten Sie die Maus mit dem Kopf nach unten fixiert und injizieren Sie 100 Mikroliter der vorbereiteten Immunogenlösung in den rechten oder linken Quadranten der unteren Bauchhöhle

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Um nach der Immunisierung eine Provokation der Augenoberfläche durchzuführen, tragen Sie 5 Mikroliter Ovalbumin, Eizellen oder Kochsalzlösung pro Auge einer anästhesierten Maus auf und warten Sie 5 Minuten, bis der Tropfen vom Auge absorbiert wird. Sammeln Sie anschließend die Augenexsudate, indem Sie unmittelbar nach der Herausforderung 50 Mikroliter sterile Kochsalzlösung auf das Auge auftragen.