Gewinnung horizontaler Schnitte des Hippocampus-Gehirns der Maus

Nehmen Sie die Hemisphären des Mausgehirns in eine Lösung mit hohem Saccharosegehalt. Befestigen Sie die Halbkugeln mit der Bauchseite nach oben auf einer Vibratom-Probenplatte mit einem Klebstoff.

Übertragen Sie die Probenplatte in die Schneidekammer.

Fügen Sie eine halbgefrorene Lösung mit hohem Saccharosegehalt hinzu, um den physiologischen Zustand des Gewebes zu erhalten und den Klebstoff zu verfestigen.

Geben Sie ein Kohlendioxid-Sauerstoff-Gemisch an, um die Sauerstoffversorgung des Gewebes aufrechtzuerhalten.

Rufen Sie mithilfe der festgelegten Parameter die anfänglichen Slices ab und entfernen Sie sie. Besorgen Sie sich außerdem horizontale Hippocampus-Scheiben.

Übertragen Sie diese Gehirnschnitte vorsichtig in eine Kammer, die ACSF enthält, um das Gewebe zu regenerieren.

Die horizontalen Hippocampus-Schnitte sind bereit für weitere Experimente.

Legen Sie beide Hemisphären mit dem ventralen Teil des Gehirns nach oben auf die frisch geschnittene dorsale Seite und geben Sie einen Tropfen Sekundenkleber auf eine Probenplatte. Verteilen Sie den Kleber mit einer Pipettenspitze auf einer großen Fläche, in der beide Gewebestücke Platz finden, und berühren Sie ein Stück Filterpapierband an der Bauchseite einer Hemisphäre. Verwenden Sie ein weiteres Filterpapierband, um die dorsale Seite des Gehirns vorsichtig halbtrocken zu trocknen, und positionieren Sie die Rückenseite der Hemisphäre nach unten auf dem Kleber auf der Probenplatte.

Verwenden Sie zwei zusätzliche Filterpapierbänder, um die zweite Halbkugel wie gerade gezeigt auf dem Kleber zu positionieren, und legen Sie die Probenplatte in die Schneidekammer. Dann den Teller schnell, aber vorsichtig mit eiskaltem Scheibenmatsch mit hohem Saccharosegehalt bedecken. Um Schnitte des Hirngewebes zu entnehmen, positionieren Sie die Vibratom-Klinge vor der medialen Seite der Hemisphären und heben Sie den Vibratom-Tisch so an, dass sich die Klinge auf der gleichen Höhe wie die ventralen Seiten der Hemisphären befindet, die nun nach oben zeigen.

Verwenden Sie die Vibratomsteuerung, um die Klinge 600 Mikrometer weiter in dorsaler Richtung abzusenken, und schneiden Sie das Gewebe auf, bis die ersten beiden Scheiben vollständig von den beiden Hemisphären getrennt sind. Wenn die ersten beiden Gewebescheiben erhalten wurden, kehren Sie die Schnittrichtung um und senken Sie die Klinge um weitere 300 Mikrometer, bevor Sie erneut schneiden. Wenn der Hippocampus sichtbar wird, verwenden Sie eine verbreiterte Pasteurpipette aus Kunststoff, um die Scheiben zu sammeln und in die Auffangkammer im Wasserbad zu übertragen.