Erzeugung von Schnitten des medialen Thalamus-anterioren cingulären Kortex aus Mausgehirnen

Beginnen Sie mit einem abgetrennten Mauskopf. Entferne die Haut, um den Schädel freizulegen, und öffne den Schädel, um Zugang zum Gehirn zu erhalten.

Entfernen Sie die Riechkolben und durchtrennen Sie alle Nervenverbindungen, um das Gehirn in eiskalte, sauerstoffhaltige künstliche Zerebrospinalflüssigkeit (aCSF) zu extrahieren.

Nehmen Sie das Gehirn und machen Sie zwei vertikale Schnitte auf jeder Hälfte, um die innere Anatomie freizulegen.

Machen Sie zwei abgewinkelte Schnitte, um die Region zu isolieren, die den medialen Thalamus-anterioren cingulären Kortex oder MT-ACC-Signalweg enthält. Der MT, ein Teil des Thalamus, fungiert als Relaisstation über neuronale Projektionen, die sich bis zum ACC im frontalen Kortex erstrecken.

Befestigen Sie das Gehirn mit einem Klebstoff auf einer abgewinkelten Platte, machen Sie einen Schnitt, um das Gehirn zu entfalten und den Weg freizulegen, und befestigen Sie es dann an einem Vibratom-Probentisch.

Platzieren Sie den Tisch im Vibratom, fügen Sie einen Puffer hinzu und generieren Sie Slices, die den MT-ACC-Signalweg enthalten.

Halten Sie die Gehirnschnitte in einem kontinuierlichen Fluss von sauerstoffreichem aCSF, um ihre Lebensfähigkeit zu erhalten.

Legen Sie den Schädel des Tieres frei und schneiden Sie den verbleibenden Muskel ab. Als nächstes schälst du die dorsale Oberfläche des Schädels mit Rongeuren ab und schneidest die Seiten ab. Schneiden Sie anschließend mit einem Spatel die Riechkolben und Nervenverbindungen entlang der ventralen Oberfläche des Gehirns ab, bevor Sie ihn entfernen.

Übertragen Sie das Gehirn schnell in ein Becherglas, das mit eiskaltem, sauerstoffreichem ACSF gefüllt ist. Um Schnitte zu erhalten, die den MT-ACC-Signalweg enthalten, machen Sie in jeder Hemisphäre einen sagittalen Schnitt 2 Millimeter lateral der Mittellinie, um die subkortikale Anatomie darzustellen.

Machen Sie dann einen abgewinkelten Querschnitt parallel zum sichtbaren Fasertrakt im Striatum. Machen Sie den zweiten abgewinkelten Schnitt von der Verbindung zwischen dem Kleinhirn und der Sehrinde bis zum Mittelpunkt zwischen der vorderen Kommissur und dem Tractus opticus, die ventral und parallel zum Thalamus cingulären Weg sind. Befestigen Sie danach den Hirnblock mit einem Cyanacrylatkleber an einer eckigen Platte.

Machen Sie einen Schnitt knapp über dem Wendepunkt des Weges. Falten Sie danach die Platte auf, glätten Sie sie und kleben Sie sie auf die Kammerstufe eines Vibratoms. Anschließend schneiden Sie die Gehirnscheiben mit einer Dicke von 500 Mikrometern und bewahren sie in eiskaltem, sauerstoffreichem ACSF auf. Übertragen Sie eine Scheibe bei 32 Grad Celsius in die Aufnahmekammer mit kontinuierlicher Perfusion von sauerstoffhaltigem ACSF für eine Stunde.