Intravenöse Verabreichung von rekombinanten Adeno-assoziierten Virusvektoren in einem Rattenmodell

Beginnen Sie mit einer betäubten Ratte, die auf der Seite liegt und den Schwanz freilegt.

Lokalisieren Sie die seitliche Schwanzvene, identifizieren Sie eine Injektionsstelle entlang ihrer Länge und desinfizieren Sie den Bereich.

Üben Sie leichten Druck über der Injektionsstelle aus, um die Vene zu erweitern.

Nehmen Sie eine Spritze, die das rekombinante Adeno-assoziierte Virus oder AAV-Vektor enthält, der das Zielgen trägt.

Richten Sie die Nadel auf die Vene aus und stechen Sie in die Schwanzhaut.

Lockern Sie den Druck auf die Vene, um den normalen Blutfluss wiederherzustellen.

Führen Sie die Nadel in die Schwanzvene ein und injizieren Sie das Virus langsam.

Ziehen Sie nach der Injektion die Nadel zurück, üben Sie Druck aus, um Blutungen zu stoppen, und überwachen Sie die Genesung der Ratte.

Die seitliche Schwanzvene gibt das Virus in den Blutkreislauf ab, wo es durch das Herz zirkuliert und in das Gehirn gelangt, wo es die Neuronen erreicht.

Im Inneren des Neurons dringt das Virus in den Zellkern ein, setzt sein genetisches Material frei und erleichtert die Produktion von Zielproteinen für neurotherapeutische Anwendungen.

Betäuben Sie die Ratte richtig mit dem Anästhesiesystem. Stellen Sie eine angemessene Anästhesieebene sicher, indem Sie keine Reaktion auf ein Zehenklemmen zeigen. Legen Sie dann die Ratte auf die Seite in den Arbeitsbereich und halten Sie die Narkose mit dem Nasenkonus aufrecht. Wenn die Ratte auf der Seite liegt, sollte eine seitliche Schwanzvene nach oben zeigen.

Die Injektionsstelle erstreckt sich zu zwei Dritteln über die Länge des Schwanzes. Wischen Sie die Injektionsstelle mit dem Alkoholvorbereitungskissen ab. Halten Sie den Schwanz mit einem Finger direkt über der seitlichen Schwanzvene fest über dem Injektionsbereich. Dadurch wird die Vene erweitert. Richten Sie die Nadel mit der Fase nach oben in die gleiche Richtung an der sichtbaren Schwanzvene aus.

Durchstechen Sie die Haut über der Schwanzvene und achten Sie dabei sehr darauf, dass die andere Hand den Schwanz nicht hält und auf die Schwanzvene drückt. Lassen Sie den Druck von der Schwanzvene ab, um einen normalen Blutfluss zu ermöglichen. Schiebe dann die Nadel in die Vene. Um sicherzustellen, dass die Nadel die Schwanzvene durchstochen hat, ziehen Sie den Kolben leicht zurück. Befindet sich die Nadel in der Vene, fließt Blut in die Nadel.

Nachdem Sie die Nadel neu positioniert haben, stabilisieren Sie die Nadel, indem Sie das Ende der Spritze gegen den Schwanz halten. Injizieren Sie den Vektor langsam mit etwa 20 Mikrolitern pro Sekunde in den Schwanz.

Im Falle einer schlechten Injektion wird das Tier nur teilweise transduziert und die Ergebnisse sind wahrscheinlich nicht brauchbar. Mit der Praxis sind gute Injektionen jedoch sehr reproduzierbar und zuverlässig.

Wenn der Vektor verabreicht wurde, entfernen Sie die Nadel vom Schwanz und drücken Sie ein Mullkissen gegen die Injektionsstelle, um die Blutung für 30 bis 60 Sekunden zu stillen. Schalten Sie die Isofluran-Anästhesie und den Sauerstoff aus. Beobachte die Ratte, bis sie wieder zu Bewusstsein kommt, und bringe sie dann in ihren Käfig zurück. Entsorgen Sie Materialien, die mit AAV kontaminiert sein könnten, in einem geeigneten Behälter für biologische Gefahrstoffe und reinigen Sie den Arbeitsplatz mit 70 % Ethanol.