Name: Ein fluoreszenzbasiertes Protokoll zur vorläufigen Screening von Proteinsyntheseinhibitoren aus natürlichen Quellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Lernen Sie ein fluoreszenzbasiertes Screening-Protokoll zur Identifizierung von Proteinsynthese-Inhibitoren aus natürlichen Quellen. Diese Methode unterstützt die Arzneimittelforschung und die Ausbildung von Studierenden.

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<ol><li>Merrick, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+and+regulation+of+eukaryotic+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Mechanism and regulation of eukaryotic protein synthesis.</a> Microbiol Rev. 56, 291-315 (1992).</li>
<li>Ng, L., Navarro, A., Law, W. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+evolving+roles+of+piRNAs+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Editorial: evolving roles of piRNAs in solid tumors.</a> Front Oncol. 13, 1178634(2023).</li>
<li>Brown, J. M., Giaccia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unique+physiology+of+solid+tumors%3A+opportunities+%28and+problems%29+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The unique physiology of solid tumors: opportunities (and problems) for cancer therapy.</a> Cancer Res. 58 (7), 1408-1416 (1998).</li>
<li>Kovalski, J. R., Kuzuoglu-Ozturk, D., Ruggero, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+synthesis+control+in+cancer%3A+selectivity+and+therapeutic+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Protein synthesis control in cancer: selectivity and therapeutic targeting.</a> EMBO J. 41 (8), e109823(2022).</li>
<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+silvestrol+analogues+as+potent+and+selective+protein+synthesis+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthetic silvestrol analogues as potent and selective protein synthesis inhibitors.</a> J Med Chem. 55 (20), 8859-8878 (2012).</li>
<li>Liu, L., Li, Z., Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+natural+inhibitors+of+protein+synthesis+for+cancer+therapy%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Harnessing natural inhibitors of protein synthesis for cancer therapy: a comprehensive review.</a> Pharmacol Res. 209, 107449(2024).</li>
<li>Dias, D. A., Urban, S., Roessner, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+overview+of+natural+products+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolites%22%5BJournal%5D)">A historical overview of natural products in drug discovery.</a> Metabolites. 2 (2), 303-336 (2012).</li>
<li>Broach, J. R., Thorner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+for+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening for drug discovery.</a> Nature. 384 (6604 Suppl), 14-16 (1996).</li>
<li>Fang, X., Zheng, Y., Duan, Y., Liu, Y., Zhong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+design+of+fluorescence-based+assays+for+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Recent advances in design of fluorescence-based assays for high-throughput screening.</a> Anal Chem. 91 (1), 482-504 (2019).</li>
<li>McKay, C. S., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click+chemistry+in+complex+mixtures%3A+bioorthogonal+bioconjugation%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Click chemistry in complex mixtures: bioorthogonal bioconjugation.</a> Chem Biol. 21 (9), 1075-1101 (2014).</li>
<li>Schneider-Poetsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+eukaryotic+translation+elongation+by+cycloheximide+and+lactimidomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of eukaryotic translation elongation by cycloheximide and lactimidomycin.</a> Nat Chem Biol. 6 (3), 209-217 (2010).</li>
<li>Liu, J., Xu, Y., Stoleru, D., Salic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+protein+synthesis+in+cells+and+tissues+with+an+alkyne+analog+of+puromycin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Imaging protein synthesis in cells and tissues with an alkyne analog of puromycin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (2), 413-418 (2012).</li>
<li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+cell+lines+as+models+for+metastatic+breast+cancer+through+integrative+analysis+of+genomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Evaluating cell lines as models for metastatic breast cancer through integrative analysis of genomic data.</a> Nat Commun. 10, 2138(2019).</li>
<li>Ma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dehydroabietylamine+exerts+antitumor+effects+by+affecting+nucleotide+metabolism+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Dehydroabietylamine exerts antitumor effects by affecting nucleotide metabolism in gastric cancer.</a> Carcinogenesis. 45 (10), 759-772 (2024).</li>
<li>Shinde, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+single-cell+adhesion+force+kinetics+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">A review of single-cell adhesion force kinetics and applications.</a> Cells. 10 (3), 577(2021).</li>
<li>Vargas-Accarino, E., Herrera-Montávez, C., Ramón y Cajal, s, Aasen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+cell+detachment+and+reattachment+in+cancer+cell+lines%3A+an+in+vitro+model+of+metastasis+and+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Spontaneous cell detachment and reattachment in cancer cell lines: an in vitro model of metastasis and malignancy.</a> Int J Mol Sci. 22 (9), 4929(2021).</li>
<li>Song, L., Hennink, E. J., Young, I. T., Tanke, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photobleaching+kinetics+of+fluorescein+in+quantitative+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Photobleaching kinetics of fluorescein in quantitative fluorescence microscopy.</a> Biophys J. 68 (6), 2588-2600 (1995).</li>
<li>Ling, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dehydroabietylamine+derivatives+target+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Dehydroabietylamine derivatives target triple-negative breast cancer.</a> Eur J Med Chem. 102, 9-13 (2015).</li>
<li>Gautam, L. N., Ling, T., Lang, W., Rivas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-proliferative+evaluation+of+monoterpene+derivatives+against+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Anti-proliferative evaluation of monoterpene derivatives against leukemia.</a> Eur J Med Chem. 113, 75-80 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agilent Biotek Cytation 1 Cell Imaging Multi-Mode Reader</td><td>Agilent&nbsp;</td><td>BTCYT1V</td><td></td></tr><tr><td>Verbindung 1 (Dehydroabietylamin, CAS 1446-61-3)</td><td>Enamine</td><td>EN300-7409771</td><td></td></tr><tr><td>Compound 2 (Bakuchiol, CAS 10309-37-2)</td><td>ChemFaces</td><td>CFN99047</td><td></td></tr><tr><td>Heraeus Megafuge 16R</td><td>Thermowissenschaftlich&nbsp;</td><td>75004271</td><td></td></tr><tr><td>Ibidi GmbH-Schlittplatte 96-Bohrloch</td><td>Ibidi</td><td>80826</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231-Zelllinien</td><td>ATCC</td><td>ATCC HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung pH 7,4</td><td>ATCC</td><td>ATCC 30-2200</td><td></td></tr><tr><td>Proteinsynthese-Assay-Kit (Grün)</td><td>Abcam</td><td>Ab239725</td><td></td></tr></tbody></table>

ein fluoreszenzbasiertes protokoll zur vorläufigen screening von proteinsyntheseinhibitoren aus natürlichen quellen

A Fluorescence-based Protocol for Preliminary Screening of Protein Synthesis Inhibitors from Natural Sources

Ein fluoreszenzbasiertes Protokoll zur vorläufigen Screening von Proteinsyntheseinhibitoren aus natürlichen Quellen

Natural products represent a rich source of therapeutic compounds with applications across multiple diseases, particularly cancer. By leveraging these ...

a-fluorescence-based-protocol-for-preliminary-screening-protein

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

In diesem Video demonstrieren wir den amplifizierten lumineszierenden homogenen Proximity-Assay – einen Bead-basierten Proximity-Assay. Es verwendet homogen große Akzeptor- und Donorkügelchen, die mit zwei Proteinen immobilisiert sind, die dazu neigen, zu interagieren, um potenzielle kleine Moleküle zu screenen, die Proteininteraktionen hemmen.

Amplifizierter lumineszierender homogener Proximity-Assay: Ein bead-basierter Proximity-Assay zum Screening kleiner Moleküle, die Protein-Protein-Wechselwirkungen hemmen

Dieses Video zeigt das Screening von immunmodulatorischen Verbindungen mittels fluoreszenzbasiertem Assay. Transgene T-Lymphozyten aus der Maus mit grün fluoreszierenden Proteinexpressionskassetten werden mit diesen Verbindungen behandelt. Die verstärkten und reduzierten GFP-Signale ermöglichen die Identifizierung der stimulierenden bzw. hemmenden Wirkungen der Verbindungen.

Ein fluoreszenzbasierter Assay mit gentechnisch veränderten Lymphozyten zum Screening immunmodulatorischer Verbindungen

Weg zur Rationalisierung der Screening für die Expression des rekombinanten Membranproteine ​​in Escherichia coli, basierend auf Fusions grün fluoreszierendes Protein dargestellt.

Green Fluorescent Protein-basierte Screening Expression von Membranproteinen in<em&gt; Escherichia coli</em

Ein Protokoll für das Screening kleiner molekularer Wirkstoffe, das auf der In-situ-Synthese von ultrakleinen fluoreszierenden Gold-Nanoclustern (Au-NCs) unter Verwendung von wirkstoffbeladenen Proteinen als Template basiert, wird vorgestellt. Diese Methode ist einfach, um die Bindungsaffinität von Wirkstoffen an ein Zielprotein durch ein sichtbares Fluoreszenzsignal zu bestimmen, das von den Protein-Template-Au-NCs emittiert wird.

Eine schnelle und quantitative fluorimetrische Verfahren zur Protein-Targeting kleines Molekül als Wirkstoff-Screening

Wir präsentieren in der aktuellen Studie eine neuartige fluoreszenzbasierten Assays von einer transgenen Maus abgeleiteten Lymphozyten. Dieser Assay ist für Hochdurchsatz-Screening (HTS) von kleinen Molekülen dotiert mit einer Kapazität von entweder Hemmung oder Förderung der Lymphozytenaktivierung geeignet.

Ein Fluoreszenz-basierte Lymphocyte Assay geeignet für Hochdurchsatz-Screening von kleinen Molekülen

Dieses Manuskript beschreibt eine Methode zum visualisieren und lokalisierte Übersetzung Veranstaltungen in subzelluläre Kompartimente zu quantifizieren. In diesem Manuskript vorgeschlagene Vorgehensweise erfordert eine grundlegende confocal imaging-System und Reagenzien und ist schnell und kostengünstig.

Quantitative Immunfluoreszenz Maßnahme Global lokalisierte Übersetzung

Eine einfach und anpassungsfähig Brühe Microdilution Methode für das screening von Antimykotika Verbindungen und Extrakte.

Brühe Microdilution In Vitro Screening: eine einfache und schnelle Methode, um neue Antimykotika Verbindungen erkennen

Hier präsentieren wir Ihnen die Einzelheiten des Verfahrens einer neu entwickelten Protease Assays Plattform nutzen N-terminalen Hexahistidine/Maltose-bindendes Protein und fluoreszierende Protein fusioniert rekombinante Substrate an der Oberfläche der Nickel-Nitrilotriacetic befestigt saure magnetische Agarose Korne. Eine anschließende Gelanalyse der Assay-Proben durch Natrium-Dodecyl-Sulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese getrennt wird ebenfalls dargestellt.

Einsatz von rekombinanten Fusionsproteinen in eine fluoreszierende Protease-Assay-Plattform und ihre In-Gel-Renaturierung

Das Nachverfolgen einzelner Übersetzungsereignisse ermöglicht hochauflösende kinetische Studien von kappenabhängigen Translationsmechanismen. Hier zeigen wir einen in vitro Einzelmolekül-Assay basierend auf bildgebenden Wechselwirkungen zwischen fluoreszierend markierten Antikörpern und epitopmarkierten aufkommenden Peptiden. Diese Methode ermöglicht die Einzelmolekülcharakterisierung der Initiations- und Peptiddehnungskinetik während der aktiven in vitro capabhängigen Translation.

Ein In Vitro Single-Molecule Imaging Assay zur Analyse von cap-dependent Translation Kinetics

Die Überwachung von Änderungen der Schmelztemperatur eines Zielproteins(z. B.Thermal Shift Assay, TSA) ist eine effiziente Methode zum Screening von Fragmentbibliotheken von einigen hundert Verbindungen. Wir präsentieren ein TSA-Protokoll, das eine robotergestützte Nano-Differential Scanning Fluorimetry (Nano-DSF) zur Überwachung der intrinsischen Tryptophanfluoreszenz und der Lichtrückstreuung für das Fragmentscreening implementiert.

Nano-Differential-Scanning-Fluorimetrie für das Screening in der fragmentbasierten Lead-Discovery

Dieses Protokoll beschreibt einen biochemischen Gel-Shift-Assay zur Messung der FEN1-Aktivität (Flap-Endonuklease 1) und der Inhibitorentwicklung.

Fluoreszenzbasierter Nachweis der FEN1-Nukleaseaktivität und Screening von niedermolekularen Inhibitoren

Lernen Sie ein fluoreszenzbasiertes Screening-Protokoll zur Identifizierung von Proteinsynthese-Inhibitoren aus natürlichen Quellen. Diese Methode unterstützt die Arzneimittelforschung und die Ausbildung von Studierenden.

Ein fluoreszenzbasiertes Protokoll zur vorläufigen Screening von Proteinsyntheseinhibitoren aus natürlichen Quellen

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