Name: Schnelle Optimierung eines lichtinduzierbaren Systems zur Kontrolle der Genexpression von Säugetieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Erfahren Sie die schnelle Optimierung lichtinduzierbarer Genexpression in Säugetierzellen mit dem optogenetischen LACE-System und HEK293T-Zellen. Diese Methode nutzt 3D-gedruckte LED-Arrays für präzise Lichtsteuerung.

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<table><tbody><tr><td>1,5-mL Mikrozentrifugenröhren</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>10-mL-Reagenzien-Reservoirs</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>10 ml serologische Pipetten</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mu; L-Filterspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL&nbsp; Hochleistungs-Zentrifugenröhren, flache Kappe</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>1931-C optischer Leistungsmesser</td><td>Newport</td><td>1931–C</td><td></td></tr><tr><td>2-mL serologische Pipetten</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 & mu; L-Filterspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu; L-Filterspitzen</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Hochleistungs-Zentrifugenröhren, Flachkappe</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-V-Bodenplatten</td><td>MARKENSCHILDER</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, LED-rote Glühbirne</td><td>Bluex Bulbs</td><td>N/A</td><td>Rote Lichtquelle</td></tr><tr><td>Arduino IDE Software</td><td>Arduino</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Biosicherheitsschrank, Klasse II</td><td>NuAire</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bright-Line-Hämozytometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>Zellzähl-Folien</td><td>BioRad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturplatte 96-Well, #1,5H Glasbodenplatte</td><td>Cellvis</td><td>P96-1,5H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert-Software</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX Ready-to-Use tägliche QC-Fluorosphären</td><td>Beckman Coulter</td><td>C65719</td><td>4 & Grad; C</td></tr><tr><td>CytoFLEX-S Flusszytometer (4 violette, 2 blaue, 4 gelbgrüne, 3 rote Kanäle)</td><td>Beckman Coulter</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos Phosphatpuffer-Kochsalzpulver, ohne Kalikum, ohne Magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>21600069</td><td>Raumtemperatur</td></tr><tr><td>Eppendorfer Zentrifuge 5804</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; 022622501</td><td>V-Bodenplatten-Zentrifugenschritt</td></tr><tr><td>Eppendorfer Zentrifuge 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research Plus, 8-Kanal, variables Volumen, 30 - 300 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research Plus, Einzelkanal, variables Volumen, 100 - 1000 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research Plus, Einkanal, variables Volumen, 2 - 20 & mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research Plus, Einkanal, variables Volumen, 20 - 200 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Allzweck-Labor-Etikettierband</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM, Pulver, hoher Blutzucker</td><td>Fisher Scientific</td><td>12100061</td><td>4 & Grad; C</td></tr><tr><td>Gibco Trypan Blue Solution, 0,4 %</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-250-061</td><td>Raumtemperatur</td></tr><tr><td>Gibco Value Heat inaktiviert FBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>A5256901</td><td>-20 &°F; C</td></tr><tr><td>Gibco, Trypsin-EDTA (0,05 %), mit EDTA, tierischen Ursprungs, 1X, Phenol Red, 500 ml</td><td>Gibco</td><td>25300062</td><td>-20 &°F; C</td></tr><tr><td>HEK293T Zellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 & Grad; C, flüssiger Stickstoff</td></tr><tr><td>Labormarker, Micronova</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>Metall-Schreibtischlampe</td><td>Einfache Entwürfe</td><td>N/A</td><td>Lampe für rotes Licht</td></tr><tr><td>OptoPlate-96</td><td>LABmaker</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid-XP</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Plasmid: CIBN-gRNA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 &°F; C</td></tr><tr><td>Plasmid: CMV-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 &°F; C</td></tr><tr><td>Plasmid: CRY2-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 &°F; C</td></tr><tr><td>PolyJet DNA In vitro Transfektionsreagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1536117</td><td>4 & Grad; C</td></tr><tr><td>T-75 Zellkulturkolbe</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>Wasserummantelter CO2 Inkubator</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

schnelle optimierung eines lichtinduzierbaren systems zur kontrolle der genexpression von säugetieren

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Schnelle Optimierung eines lichtinduzierbaren Systems zur Kontrolle der Genexpression von Säugetieren

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

rapid-optimization-light-inducible-system-to-control-mammalian-gene

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Dieses Video demonstriert das Genexpressionssystem von Tetracyclin oder Tet-On in einem Mausmodell. In Gegenwart von Doxycyclin, einem Tetracyclin-Derivat, wird das Tet-On-System, bestehend aus reversem Tetracyclin-kontrolliertem Transaktivatorprotein, aktiviert und exprimiert das interessierende Gen.

Induzierbare Tet-On-regulierbare systembasierte Genexpression in vivo: Ein Tetracyclin-induziertes Genexpressionssystem für die Aktivierung der Zielgentranskription im Mausmodell

Dieses Protokoll beschreibt ein experimentelles Verfahren für die schnelle Konstruktion von künstliche Transkriptionsfaktoren (ATF) mit zugehörigen GFP-Reporter und Quantifizierung des ATF Fähigkeit GFP-Expression mittels Durchflusszytometrie stimulieren.

Rapid-Synthese und Screening von Chemisch aktivierte Transkriptionsfaktoren mit GFP-basierte Reporter

Die hier beschriebene Methode wird verwendet, um die apoptotische Signalkaskade in definierten Schritten zu induzieren, um die Aktivität eines anti-apoptotischen bakteriellen Effektorproteins zu entschlüsseln. Diese Methode kann auch zur induzierbaren Expression von pro-apoptotischen oder toxischen Proteinen oder zur Störung von Interferenzen mit anderen Signalwegen verwendet werden.

Anlegen eines induzierbaren Expression System zu Störungen der bakteriellen Virulenzfaktoren mit Intrazelluläre Signal Studieren

Dieses Protokoll beschreibt eine optogenetische Strategie zur Modulation der mitogenaktivierten Proteinkinase (MAPK) Aktivität während der Zelldifferenzierung und der Xenopus embryonalen Entwicklung. Diese Methode ermöglicht die reversible Aktivierung des MAPK-Signalwegs in der Säugerzellkultur und in multizellulären Lebendorganismen wie Xenopus- Embryonen mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung.

Lichtvermittelte reversible Modulation des mitogenaktivierten Proteinkinase-Pathways während der Zelldifferenzierung und<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonale Entwicklung

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zu analysieren von Zelle zu Zelle Übertragung der oszillierenden Informationen durch optogenetische Kontrolle und Überwachung der Genexpression zu leben. Dieser Ansatz bietet eine einzigartige Plattform, um eine funktionale Bedeutung der dynamischen Ausdruck Genprogramme in mehrzelligen Systeme zu testen.

Eine optogenetische Methode zu kontrollieren und analysieren gen Expressionsmuster in Zell-Zell-Interaktionen

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte erforderlich, um ein Modellsystem, in dem die Transkription des endogenen Gens von Interesse bedingt gesteuert werden kann, in lebenden Tieren oder Zellen mit verstärkten Lac Repressor und/oder Tet Aktivator Systeme generieren.

In-vivo Anwendung der REMOTE-Steuerung für die Manipulation von endogenen Genexpression

Die zuverlässige Kontrolle lichtempfindlicher Säugetierzellen erfordert die Standardisierung optogenetischer Methoden. Um dieses Ziel zu erreichen, skizziert diese Studie eine Pipeline von Genschaltkreiskonstruktion, Zelltechnik, optogenetischem Gerätebetrieb und Verifikationsassays, um die Untersuchung der lichtinduzierten Genexpression unter Verwendung eines optogenetischen Genschaltkreises mit negativer Rückkopplung als Fallstudie zu standardisieren.

Zuverlässige Entwicklung und Kontrolle stabiler optogenetischer Genschaltkreise in Säugetierzellen

Optogenetik ist ein leistungsfähiges Werkzeug mit vielfältigen Anwendungen. Dieses Protokoll zeigt, wie eine lichtinduzierbare Genexpression in Zebrafischembryonen mit dem blaulichtempfindlichen TAEL/C120-System erreicht werden kann.

Lichtinduzierte GFP-Expression in Zebrafischembryonen mit dem optogenetischen TAEL/C120-System

Biolumineszenz-Licht, das von einem Luciferase-Enzym emittiert wird, das ein niedermolekulares Substrat, ein Luciferin, oxidiert, kann genutzt werden, um photosensorische Proteine zu aktivieren, wodurch der Lichtstimulation eine weitere Dimension hinzugefügt und die Manipulation einer Vielzahl von lichtvermittelten Funktionen in Zellen über zeitliche und räumliche Skalen hinweg ermöglicht wird.

Biolumineszente Optogenetik 2.0: Nutzung der Biolumineszenz zur Aktivierung photosensorischer Proteine in vitro und in vivo

Die optogenetische Kontrolle des mikrobiellen Stoffwechsels bietet eine flexible dynamische Kontrolle über Fermentationsprozesse. Das Protokoll zeigt hier, wie man blaulichtregulierte Fermentationen für die chemische und Proteinproduktion auf verschiedenen volumetrischen Skalen aufbaut.

Lichtgesteuerte Fermentationen für die mikrobielle Chemikalien- und Proteinproduktion

Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung einer technisch hergestellten Blue-Light-aktivierten allosterischen Schalterdomäne (LightR) zur reversiblen raumzeitlichen Kontrolle der Proteinaktivität. Unter Verwendung der Src-Tyrosinkinase als Modell bietet diese Studie ein ausgeklügeltes Protokoll zur Entwicklung und Charakterisierung von lichtreguliertem Src (LightR-Src). Es zeigt die Vielseitigkeit dieses Ansatzes über Enzymklassen hinweg.

Raumzeitliche Steuerung der Proteinaktivität durch optogenetische allosterische Regulation

Erfahren Sie die schnelle Optimierung lichtinduzierbarer Genexpression in Säugetierzellen mit dem optogenetischen LACE-System und HEK293T-Zellen. Diese Methode nutzt 3D-gedruckte LED-Arrays für präzise Lichtsteuerung.

Schnelle Optimierung eines lichtinduzierbaren Systems zur Kontrolle der Genexpression von Säugetieren

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