Name: Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie von Membranproteinen mittels Einzel-Antikörper-Markierung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Erfahren Sie die Einzel-Antikörper-Markierung für nanoskopische Visualisierung von Membranproteinen in T-Zellen. Diese Methode ermöglicht die direkte Beobachtung von Antikörper-Epitop-Interaktionen in vivo.

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<table><tbody><tr><td>anti-CD81 Alexa Fluor 488 Antikörper</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MA5-44132</td><td>Bildgebende Antikörper</td></tr><tr><td>Tischzentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>MilliporeSigma</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>Kammer-Deckglas, 8-Schacht</td><td>Cellvis</td><td>C8-1-N</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Media</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11960069</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum</td><td>MilliporeSigma</td><td>F0926-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyd, 10 %</td><td>Elektronenmikroskopiewissenschaften</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Goldkolloide, 100 nm</td><td>Ted Pella</td><td>15711 & minus; 20</td><td>Treuhänder</td></tr><tr><td>Immersionsöl&nbsp;</td><td>Cargille Laboratories</td><td>16245</td><td></td></tr><tr><td>Invertiertes Mikroskop&nbsp; ausgestattet mit einem TIRF-Modul</td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse Ti2-E</td><td>Mikroskop</td></tr><tr><td>Jurkat E6.1 Zelllinie</td><td>MilliporeSigma</td><td>88042803-1VL</td><td>Suspensionszellen</td></tr><tr><td>Laserstart, 6 Linien</td><td>Oxxius</td><td>L6CC-CS8-1511</td><td>Anregungslaser</td></tr><tr><td>Lipofectamin 2000</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Transfektionsreagenz</td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhre, 1,5 mL&nbl;</td><td>VWR</td><td>89000-028</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopie-Bildgebungssoftware</td><td>Nikon Instruments</td><td>NIS-Elements Fortgeschrittene Forschung</td><td>Bildakquisitionssoftware</td></tr><tr><td>Ziel, 100x/1,49 CFI APO TIRF&nbsp;</td><td>Nikon Instruments</td><td>MRD01991</td><td>Mikroskopobjektiv</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd, 16 %</td><td>Elektronenmikroskopiewissenschaften</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td>Antibiotika</td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin-Lösung, 0,01%&nbsp;</td><td>MilliporeSigma</td><td>P4707-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Prime 95B sCMOS-Kamera</td><td>Teledyne Vision Solutions</td><td>01-PRIME-95B-R-M-16-C</td><td>Kamera</td></tr><tr><td>RPMI 1640-Medien</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875-093</td><td>Medien für Suspensionszellen</td></tr><tr><td>Natriumazid</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19038-1000</td><td></td></tr><tr><td>Natriumborhydrid</td><td>MilliporeSigma</td><td>213462-25G</td><td></td></tr><tr><td>T25-Kulturkolben</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>TetraSpeck-Mikrosphären</td><td></td><td></td><td>Treuhänder</td></tr><tr><td>Gewebekulturschale, 100 mm & nbspoon;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>U2OS-Zelllinie</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Adhärente Zellen</td></tr></tbody></table>

einzelmolekül-lokalisationsmikroskopie von membranproteinen mittels einzel-antikörper-markierung

Single-Molecule Localization Microscopy of Membrane Proteins using Single-Antibody Labeling

Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie von Membranproteinen mittels Einzel-Antikörper-Markierung

The plasma membrane defines the cell shape and serves as the interface that governs intercellular communication. Membrane proteins constitute a major ...

single-molecule-localization-microscopy-membrane-proteins-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Wir demonstrieren die Verwendung von Fluoreszenz-Photoaktivierungs-Lokalisierungsmikroskopie (FPALM), um gleichzeitig mehrere Arten von fluoreszenzmarkierten Molekülen in Zellen abzubilden. Die beschriebenen Techniken ermöglichen die Lokalisierung von Tausenden bis Hunderttausenden einzelner fluoreszierend markierter Proteine mit einer Genauigkeit von Dutzenden von Nanometern innerhalb einzelner Zellen.

Simultane Multicolor-Imaging biologischer Strukturen mit Fluoreszenzphotoaktivierung Lokalisationsmikroskopie

Dieses Protokoll beschreibt, wie die Totalreflexions-Fluoreszenzmikroskopie verwendet wird, um einzelne Rezeptoren auf der Oberfläche lebender Zellen sichtbar zu machen und zu verfolgen und dadurch die laterale Beweglichkeit der Rezeptoren, die Größe von Rezeptorkomplexen sowie die Visualisierung transienter Rezeptor-Rezeptor-Wechselwirkungen zu analysieren. Dieses Protokoll kann auf andere Membranproteine ausgeweitet werden.

Hochauflösende Räumlich-zeitliche Analyse der Rezeptordynamik von Einzelmolekül-Fluoreszenzmikroskopie

Die Herstellung von proteinfunktionalisierten planaren glasgestützten Lipiddoppelschichten, die Bestimmung der Proteinmobilität innerhalb und die Messung von Proteindichten wird hier gezeigt. Es wird eine Roadmap zum Bau eines rauschreduzierten Totalreflexionsmikroskops skizziert, das die Visualisierung von in einzelnen Doppelschichten residenten Fluorochromen mit hoher raumzeitlicher Auflösung ermöglicht.

Einzelmolekülfluoreszenzmikroskopie auf Planar Unterstützte Bilayers

Wir zeigen eine Methode, um mehrere Moleküle innerhalb heterogener Nanostrukturen bei Einzelmolekülgenauigkeit unter Verwendung sequentieller Bindung und Elution von fluoreszenzmarkierten Antikörpern abzubilden.

Hochmultiplexed, Super-Auflösung Bildgebung von T-Zellen mit madSTORM

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die multi-Color Lokalisierung der einzelnen Membranproteine in Organellen der lebenden Zellen. Um Fluorophore zu befestigen, sind selbst Kennzeichnung Proteine verwendet. Proteine, befindet sich in verschiedenen Membranen Kompartimenten des die gleichen Organellen lokalisiert werden können, mit einer Genauigkeit von ~ 18 nm.

Multi-Color-Lokalisierung Mikroskopie des einzigen Membranproteine in Organellen der lebenden Säugetier-Zellen

Wir präsentieren ein Protokoll für die Echtzeit-optische Erkennung von einzelnen unbeschriftete Proteine, wie sie von lebenden Zellen abgesondert werden. Grundlage hierfür ist interferometrischen Streuung (iSCAT) Mikroskopie, die auf eine Vielzahl von unterschiedlichen biologischen Systemen und Konfigurationen angewendet werden können.

Markierungsfreie Imaging der einzelnen Proteine abgesondert von lebenden Zellen über iSCAT Mikroskopie

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um die Kennzeichnung Homogenität für jede Art von Protein in einer komplexen Protein-Probe auf der Einzelmolekül-Ebene zu bewerten.

Proteom-weite Quantifizierung des Benennens Homogenität auf der Ebene des einzelnen Moleküls

Die 3D-Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie wird verwendet, um die räumlichen Positionen und Bewegungsbahnen fluoreszierend markierter Proteine in lebenden Bakterienzellen zu untersuchen. Das hier beschriebene experimentelle und Datenanalyseprotokoll bestimmt das vorherrschende diffusive Verhalten von zytosolischen Proteinen auf der Grundlage gepoolter Einzelmolekülbahnen.

Single-Molecule Tracking-Mikroskopie - Ein Werkzeug zur Bestimmung der diffusiven Zustände von zytosolischen Molekülen

Dieses Protokoll beschreibt einen iSCAT-basierten Bildverarbeitungs- und Einzelpartikel-Tracking-Ansatz, der die gleichzeitige Untersuchung der Molekülmasse und des diffusiven Verhaltens von Makromolekülen ermöglicht, die mit Lipidmembranen interagieren. Schritt-für-Schritt-Anleitungen für die Probenvorbereitung, die Konvertierung von Masse in Kontrast, die Filmaufnahme und die Nachbearbeitung werden zusammen mit Anweisungen bereitgestellt, um mögliche Fallstricke zu vermeiden.

Massensensitive Partikelverfolgung zur Charakterisierung der membranassoziierten Makromoleküldynamik

Hier wird ein Protokoll zur Durchführung und Analyse der Bindung, Mobilität und Assemblierung einzelner Moleküle auf künstlichen überfüllten Lipidmembranen unter Verwendung der Einzelmolekül-Totalreflexionsfluoreszenzmikroskopie (smTIRF) vorgestellt.

Einzelmoleküldiffusion und Assemblierung auf polymerüberfüllten Lipidmembranen

Dieser Artikel bietet eine detaillierte Beschreibung, wie Proben für die Tracking von Einzelproteinen in festgestützten Lipiddoppelschichten erstellt werden können. Es erklärt außerdem ein einfaches Fluoreszenzmikroskop mit Einzelmolekülempfindlichkeit und hoher Bildrate. Abschließend skizzieren wir das Verfahren zur Extraktion von Einzelprotein-Trajektorien.

Verfolgung einzelner Proteine in Lipid-Doppelschichten mittels Fluoreszenzmikroskopie

Erfahren Sie die Einzel-Antikörper-Markierung für nanoskopische Visualisierung von Membranproteinen in T-Zellen. Diese Methode ermöglicht die direkte Beobachtung von Antikörper-Epitop-Interaktionen in vivo.

Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie von Membranproteinen mittels Einzel-Antikörper-Markierung

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