Cosecha de médula ósea de la extremidad trasera del ratón

- La médula ósea es el tejido gelatinoso esponjoso presente en el centro hueco de los huesos. Contiene células madre hematopoyéticas, que producen las células sanguíneas, un componente clave del sistema inmunitario. El aislamiento de la médula ósea de los huesos más grandes, como el fémur y la tibia, proporciona un alto rendimiento celular.

Para recolectar médula ósea, coloque un ratón sacrificado en posición supina y esterilice la piel con etanol. Corta la cavidad abdominal y retira la piel para exponer las extremidades traseras. Rompe la tibia, un hueso largo de la pierna, y colócalo en PBS frío para mantener las condiciones fisiológicas. Disloque la rótula y retire los músculos para exponer el fémur, el hueso del muslo.

Corte el fémur de la parte inferior del hueso y colóquelo en PBS frío. Haga un agujero en un tubo de microcentrífuga de menor volumen y coloque ambos huesos en él con el extremo abierto de los huesos hacia el orificio. Coloque el tubo que contiene los huesos en un tubo de microcentrífuga de mayor volumen y centrifuga los tubos de doble capa para granular la médula ósea. Utilice la médula ósea extraída para un análisis más detallado. En este protocolo, extraeremos médula ósea de las extremidades traseras de un ratón.

- Para una recolección de médula ósea, coloque un ratón C57 black-6 de 6 a 10 semanas de edad en posición supina sobre una almohadilla quirúrgica estéril y use etanol al 70% para esterilizar el abdomen y las extremidades traseras. Use un par de tijeras quirúrgicas de disección para abrir la cavidad abdominal y retire la piel para exponer las extremidades traseras. Con un par de pinzas de vendaje de punta roma, sostenga la tibia del ratón justo debajo del tobillo y use un par de pinzas de vendaje curvadas para estabilizar la tibia por debajo de las pinzas de vendaje de punta roma.

Use las pinzas de vendaje de punta roma para romper la tibia y extraer el músculo para exponer el hueso, antes de colocar la tibia en PBS frío. Mueva las pinzas de vendaje curvadas estabilizadoras al fémur y deslice las pinzas de vendaje de punta roma por debajo de la articulación de la rodilla para sujetar la rótula. Tire suavemente hacia arriba para dislocar la rótula y retire el músculo de la rótula para exponer el fémur. Sostenga el fémur expuesto por las pinzas de vendaje curvadas y use unas tijeras quirúrgicas para cortar el fémur desde la parte inferior del hueso. Luego, coloque el fémur en PBS.

A continuación, utilice una aguja de calibre 18 para perforar un agujero en un tubo de microcentrífuga de 0,5 mililitros y coloque ambos huesos en el tubo con los extremos abiertos de los huesos hacia abajo en el agujero. Coloque el tubo de 0,5 mililitros en un tubo de microcentrífuga de 1,7 mililitros y haga girar los tubos de doble capa en una microcentrífuga. Al final de la centrifugación, confirme que la médula ósea se ha extraído hasta el fondo del tubo.