Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiology
0 visualizaciones • 2:17 min. • August 29th, 2025
Comience con un tubo que contenga un gradiente de densidad discontinuo preestablecido, preparado con partículas de sílice coloidal no tóxicas recubiertas con polivinilpirrolidona.
El gradiente comprende tres capas no superpuestas dispuestas en orden de densidades crecientes de arriba a abajo.
Tomemos una biblioteca de mutantes de transposones bacterianos, una suspensión combinada de cepas bacterianas con mutaciones aleatorias inducidas por transposones.
Un subconjunto de estas mutaciones altera los genes que regulan la cápsula, una capa de polisacáridos que rodea la pared celular bacteriana, lo que da como resultado cepas con cantidades variables de cápsulas.
Agregue la biblioteca bacteriana a la parte superior del degradado muy lentamente, sin mezclar la interfaz.
Centrifugar el tubo a una velocidad moderada.
El gradiente facilita la migración diferencial de bacterias en función de sus cantidades de cápsulas.
Las cepas hiperencapsuladas, al ser menos densas debido a su capa de polisacáridos hidratados, se localizan cerca de la parte superior.
Las cepas débilmente encapsuladas se asientan en el medio, y las cepas no encapsuladas y más densas migran al fondo.
Las cepas bacterianas separadas están listas para el análisis posterior.
Agregue con cuidado 600 microlitros de las células preparadas a la parte superior del gradiente en el tubo. Luego coloque el tubo en un adaptador de tubo y pese el tubo con el adaptador para asegurar el equilibrio. Después de esto, coloque el adaptador de tubo en un rotor de ángulo fijo dentro de una centrífuga de sobremesa y centrifugue el tubo durante 30 minutos a 3.000 g.
Finalmente, después de la centrifugación, retire el tubo con cuidado, colóquelo en una rejilla y fotografíe los resultados.