Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiology
0 visualizaciones • 2:35 min. • September 26th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga medios de agar previamente localizados con bacterias de ARNi, con o sin un inserto específico de gen dirigido a un gen de C. elegans .
Siembre gusanos sincronizados en etapa L1 en los pozos e incube para permitir la alimentación de las bacterias de ARNi.
El inserto produce ARN de interferencia que se dirige a genes específicos del gusano, generando un fenotipo de eliminación específico del gen.
Agregue tampón a los pocillos y vuelva a suspender suavemente los gusanos.
Transfiera la suspensión a una placa de pocillo profundo y deje que los gusanos se asienten por gravedad.
Retire el sobrenadante, reteniendo un poco de tampón.
Lave los gusanos con tampón, luego deseche el sobrenadante, dejando una pequeña cantidad de tampón.
A continuación, tome una placa de ensayo de varios pocillos que contenga bacterias patógenas.
Dispensar un número definido de gusanos de control y derribo en sus respectivos pocillos para permitir interacciones huésped-patógeno. Las bacterias patógenas secretan compuestos que inducen la mortalidad de los gusanos.
Comparar la mortalidad de los gusanos para evaluar el efecto de la eliminación de genes específicos en la supervivencia de los gusanos.
Agregue un mililitro de S Basal por pocillo de una placa de 24 pocillos que contenga 300 gusanos por pocillo. Agite suavemente los gusanos agitando la placa, luego transfiera los gusanos a una placa vacía y estéril de 24 pocillos profundos.
Deje que los gusanos se asienten gravitacionalmente, unos cinco minutos. Aspirar el sobrenadante, dejando aproximadamente un mililitro por pocillo, luego agregar 7 mililitros de S Basal a cada pocillo. Repita el lavado dos veces más y luego, después del lavado final, aspire todo menos aproximadamente 400 microlitros de sobrenadante.
Después de pipetear las bacterias en placas de 384 pocillos para evitar la inanición, utilizando la función de remuestreador del clasificador de lombrices, clasifique 22 lombrices en cada pocillo de una placa de 384 pocillos. Finalmente, después de la clasificación, agregue moléculas pequeñas u otros materiales específicos del experimento.