Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiology
0 visualizaciones • 2:47 min. • October 30th, 2025
Comience con una rata experimental pretratada con bacterias beneficiosas y una rata de control a la que se le administró solución salina tamponada con fosfato o PBS.
Exponga a ambas ratas a altas temperaturas para inducir estrés fisiológico.
En la rata de control, el estrés por calor altera la barrera epitelial intestinal, lo que permite que las bacterias derivadas del intestino se transloquen y se propaguen a los órganos internos.
Sin embargo, en ratas experimentales, las bacterias beneficiosas liberan moléculas de señalización que preservan las uniones epiteliales y reducen la translocación bacteriana.
Tome tubos que contengan las muestras de hígado recolectadas de cada rata.
Agregue PBS y homogeneice las muestras para liberar bacterias en el tampón.
Extienda el homogeneizado diluido en placas de agar ricas en nutrientes.
Incube las placas para permitir que se formen colonias bacterianas. Luego, cuente las colonias.
Los recuentos de colonias más altos en la muestra de control indican una alteración de la barrera intestinal y una translocación bacteriana.
Por el contrario, menos colonias en la muestra experimental indican el efecto de las bacterias beneficiosas para limitar la translocación bacteriana en el intestino.
Después de tratar a las ratas por sonda oral con B. subtilis BSB3 o PBS durante dos días, luego subdividir a los animales y tomarles la temperatura, mantenga a las ratas de los grupos uno y dos a temperatura ambiente durante 25 minutos. Coloque a los animales de los grupos tres y cuatro en una cámara climática a 45 grados centígrados y 55% de humedad relativa durante 25 minutos.
Luego, después de sacrificar a los animales, recolectar la sangre del tronco y aislar los órganos de acuerdo con el protocolo de texto, agregue PBS estéril a cada tubo para obtener una dilución de peso por volumen de uno a diez de la muestra, y use un homogeneizador de tejido de vidrio estéril para generar suspensiones de tejido homogéneas.
A continuación, use PBS estéril para hacer diluciones en serie de cada muestra. Luego, coloque 0,1 mililitros de todas las diluciones en la superficie de MacConkey y agar en sangre al 5%, y agar en sangre Brucella con hemina y vitamina K1. Después de incubar las placas, use un contador de colonias para contar las colonias en cada grupo de placas.