Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiology
0 visualizaciones • 2:25 min. • March 31st, 2026
Coloque los tubos de reacción en cadena de la polimerasa o PCR que contienen tabletas listas para PCR específicas para los patógenos alimentarios objetivo en una rejilla refrigerada para tubos PCR.
Cada comprimido incluye cebadores específicos para el objetivo, ADN polimerasa, dNTPs y un colorante fluorescente utilizado en la reacción PCR.
Añade lisato de mosca enriquecido que contenga una gran cantidad de ADN de bacterias patógenas para formar la mezcla de reacción.
Sella los tubos con tapones ópticos para evitar la evaporación.
Carga los tubos de PCR en el ciclador térmico y realiza procesos de PCR separados usando programas específicos de patógeno para cada patógeno objetivo.
Durante la PCR, el ADN se desnaturaliza, los cebadores se ligan a la secuencia objetivo y la amplificación produce ADN de doble cadena que se une al tinte y emite fluorescencia.
Los ciclos repetidos resultan en una amplificación exponencial del ADN y un aumento de la fluorescencia.
El instrumento rastrea la fluorescencia en tiempo real para detectar la presencia de los patógenos alimentarios objetivo en la muestra.
Para comenzar la detección basada en PCR, primero enfría un bastidor de tubos de PCR sobre un bloque de refrigeración. Después, coloque los tubos de PCR correspondientes que contienen tabletas listas para PCR del patógeno alimentario objetivo en el portarecipientes.
Retira cuidadosamente los tapones de los tubos de PCR usando la herramienta de destapado y deséchalos. Verifica que cada tubo contenga una pastilla. Luego, transfiere 50 microlitros de lisato a los tubos de PCR correspondientes.
Fija los nuevos condensadores ópticos en los tubos de PCR usando la herramienta de tapado. Tras ensamblar las reacciones, carga los tubos de PCR en el sistema de detección del ciclador de PCR. Luego, ejecuta el programa y ve los resultados tal y como se describe en el protocolo del fabricante.