Diferenciación de células progenitoras neurales inducidas en astrocitos

Tome un cultivo de células progenitoras neurales inducidas, o iNPC, en una placa multipocillo recubierta de proteínas de matriz extracelular.

Reemplace el medio con medios de inducción glial e incube. Los factores de crecimiento y las hormonas en el medio facilitan la diferenciación de iNPC en células precursoras gliales.

Cambiar los medios cada dos días para la proliferación celular. Luego, reemplace el medio con medios de astrocitos e incube.

Los nutrientes específicos y los factores de crecimiento en el medio impulsan la diferenciación de las células precursoras gliales en astrocitos.

Los cambios en los medios cada dos días promueven la maduración de los astrocitos.

Cambie el medio a neuro-diff-medium cuando las células sean aproximadamente 70% confluentes y continúe cambiando el medio cada dos días durante tres semanas. No divida las células durante la diferenciación. Después de tres semanas, las células deberían expresar el marcador neuronal TuJ1.

Para obtener neuronas y subtipos neuronales más maduros, continúe la diferenciación hasta tres meses. Para la diferenciación de iNPC específicamente hacia un linaje glial, cambie el medio a medio de inducción glial, incluidos 20 nanogramos por mililitro de factor de crecimiento epidérmico para inducir la diferenciación en células precursoras gliales. Retire la mitad del medio y reemplácelo con medio nuevo cada dos días durante aproximadamente dos semanas.

Durante este período, las células deben dividirse de 1 a 3 en presencia de 10 inhibidores micromolares de la Rho-quinasa cuando se alcanza el 100% de confluencia. Después de dos semanas, diferencie las células aún más en astrocitos cambiando el medio a un medio de astrocitos disponible comercialmente cuando las células estén casi confluentes y continuando cambiando el medio cada dos días. Aproximadamente siete días después, las células comienzan a expresar marcadores de astrocitos.