Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neuroscience
0 visualizaciones • 2:26 min. • July 8th, 2025
Tomemos las neuronas inducidas por humanos, o iNs, cultivadas en una matriz extracelular.
Retire el medio y agregue enzimas digestivas que alteren la matriz, disociando las células.
Transfiera los iNs a un tubo. Centrifugar la suspensión y desechar el sobrenadante que contiene las enzimas.
Vuelva a suspender las iN en un medio de cocultivo; transfiéralas a un cultivo de células precursoras de oligodendrocitos inducidas, o iOPC.
Las iOPC son precursoras de oligodendrocitos que forman vainas de mielina alrededor de los axones de las neuronas.
Tras la incubación, las iOPC forman conexiones sinápticas con las iNs. Los factores tróficos liberados por las iOPC y los factores de crecimiento en el medio promueven la maduración de iN en neuronas, exhibiendo un aumento de los procesos celulares que forman conexiones sinápticas con otras neuronas.
La actividad eléctrica de las neuronas maduras y los factores de crecimiento en el medio induce la maduración de iOPC en oligodendrocitos.
Los oligodendrocitos extienden los procesos celulares, formando vainas de mielina alrededor de los axones neuronales.
La cocultura establecida está lista para el análisis.
El día 14, coloque iOPC en placas a una densidad de 1 x 105 células por pocillo en una placa de 24 pocillos en medio de diferenciación OPC. Al día siguiente, separe las neuronas humanas inducidas con una solución de desprendimiento celular. Agregue neuronas a los OPC cultivados, sembrando a la densidad de asiento de 2 x 105 células por pocillo. Use un medio de cocultivo que contenga medio A neurobasal, suplemento de B-27 al 2% y 100 nanogramos por mililitro de triyodotironina T3. Cambie el medio al día siguiente y luego cada dos días. Si los OPC proliferan demasiado rápido y alcanzan la confluencia en menos de tres días, agregue de 2 a 5 micromolares de Ara-C.