Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neuroscience
0 visualizaciones • 2:37 min. • April 28th, 2025
Comience con una sección gruesa del cerebro que se tiñó con una solución de Golgi-Cox para oscurecer selectivamente las neuronas y se contratiñó con violeta de cresilo para resaltar la región del cerebro.
Colóquelos en un portaobjetos que haya sido pretratado con un agente aclarante para mejorar la transparencia del tejido.
Coloque el portaobjetos en la platina del microscopio, aplique aceite de silicona y baje la lente del objetivo hasta que entre en contacto con el aceite.
El aceite de silicona coincide con el índice de refracción de la lente del objetivo y el portaobjetos, lo que permite obtener imágenes detalladas.
Enfoca en la muestra, luego ajusta la exposición de la cámara y el balance de blancos para obtener una calidad de imagen óptima.
Enfoca en la capa superior para establecer el límite superior, luego en la capa inferior para establecer el límite inferior.
Ajusta el espaciado entre imágenes con suficiente superposición para capturar detalles de proyecciones neuronales.
Repita las imágenes en diferentes ubicaciones para capturar áreas de interés, luego superponga estas imágenes para crear una representación tridimensional de las neuronas.
Para capturar pilas de imágenes de alta resolución del área que contiene la neurona de interés, primero seleccione un objetivo de inmersión en aceite de silicona de 30x 1,05 NA en el microscopio. Luego, aplique de 3 a 4 gotas de aceite de inmersión de silicona en el portaobjetos. Coloque el objetivo sobre la corredera, asegurando el contacto entre el objetivo y el aceite. Enfoque la imagen y ajuste la configuración de la cámara, incluida la exposición y el balance de blancos en el software de imágenes. A continuación, establezca los límites superior e inferior de la pila de imágenes centrándose en la parte superior de la sección y, a continuación, seleccionando Establecer, junto a la parte superior de la pila, dentro de la ventana de adquisición de imágenes.
Luego concéntrese en la parte inferior de la sección y seleccione Establecer junto a la parte inferior de la pila. Establezca la distancia de paso en 1 micra introduciendo 1 micra junto a la distancia entre imágenes dentro de la ventana de adquisición de imágenes. Por último, capture la pila de imágenes seleccionando adquirir pila de imágenes dentro de la ventana de adquisición de imágenes. Repita los pasos anteriores para capturar toda el área de interés, asegurándose de que todas las pilas de imágenes se superpongan al menos un 10% en los ejes x e y.