Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neuroscience
0 visualizaciones • 2:29 min. • August 7th, 2025
Tome un ratón anestesiado con un monofilamento insertado en su arteria cerebral media para inducir la oclusión.
Esto bloquea el flujo sanguíneo al cerebro, lo que desencadena una isquemia focal.
La oclusión restringe el suministro de oxígeno y glucosa, lo que provoca el agotamiento de ATP y la despolarización neuronal.
Las neuronas despolarizadas liberan un exceso de glutamato, que se une a los receptores postsinápticos, causando una afluencia masiva de calcio.
El calcio intracelular elevado interrumpe la función mitocondrial y promueve la producción de ROS, iniciando daño neuronal.
Vuelva a anestesiar al ratón.
Vuelva a abrir la incisión y retire el monofilamento para lograr la reperfusión.
La reintroducción repentina de oxígeno genera un exceso de ROS de las mitocondrias disfuncionales, lo que empeora la lesión neuronal.
Para mitigar esto, exponga el ratón a una mezcla de gas con alto contenido de dióxido de carbono para el postacondicionamiento ácido o APC después de que comience la reperfusión.
Esto aumenta la concentración de protones en el cerebro, inhibiendo los receptores, reduciendo la entrada de calcio y previniendo la excitotoxicidad mediada por calcio.
Además, APC estabiliza las mitocondrias e inhibe la producción de ROS, proporcionando así neuroprotección.
55 minutos después del inicio de la oclusión, vuelva a anestesiar al animal con isoflurano y colóquelo como antes. Luego abra la incisión del cuello y vuelva a exponer la arteria carótida común. Después del período de oclusión, use pinzas oftálmicas para extraer suavemente el filamento para lograr la reperfusión. Luego convierta la sutura temporal en una permanente apretando el nudo. Para el tratamiento de la acidosis, cambie el gas inhalado por el cono de la nariz a 20% de dióxido de carbono, 20% de oxígeno y 60% de nitrógeno durante cinco minutos. Después de cerrar la incisión con una sutura quirúrgica interrumpida, coloque al ratón en una jaula calentada a 30 grados Celsius hasta que recupere la conciencia.