Trasplante de células precursoras de interneuronas derivadas de humanos en el hipocampo de la cría de ratón

Asegure un cachorro de ratón genéticamente modificado anestesiado en un marco estereotáxico usando barras para los oídos en dirección opuesta para evitar lesiones.

El hipocampo del cachorro tiene interneuronas inhibitorias reducidas, lo que lleva a la hiperexcitación de las neuronas excitadoras.

Mantenga una posición de cabeza plana y cubra al cachorro con hielo para prolongar la anestesia.

Desinfecte el cráneo e identifique la sutura lambda como punto de referencia.

Coloque la aguja de inyección en las coordenadas del hipocampo objetivo.

Con una aguja doblada, cree un orificio de microentrada mientras minimiza el daño al cráneo.

Baje la aguja a la profundidad objetivo e inyecte células precursoras de interneuronas derivadas de humanos a una velocidad controlada, minimizando el daño tisular.

Retraiga lentamente la aguja para evitar el reflujo celular.

Retire al cachorro del marco, caliéntelo hasta que se reanude el movimiento, luego devuélvalo a la arena en la jaula.

Las células precursoras inyectadas se dispersan por el hipocampo, maduran y se integran en la red neuronal. Con el tiempo, mejoran la transmisión inhibitoria, lo que restaura el equilibrio excitatorio-inhibitorio.

Coloque al cachorro colocándolo en el marco estereotáxico y usando las barras para los oídos en la dirección opuesta. A continuación, limpie la superficie de la piel con un pañuelo blando empapado en etanol. Identifique lambda y establezca las coordenadas en 0 en la consola de visualización digital del instrumento estereotáxico.

Después de reubicar la jeringa Hamilton en las coordenadas deseadas, use una aguja de insulina doblada a 90 grados para penetrar el cráneo, creando un pequeño agujero. Luego baje la jeringa de Hamilton hasta que la aguja cruce el cráneo y 0 la coordenada dorsoventral.

Baje la aguja hasta lograr las coordenadas dorsoventrales deseadas. Retraiga la aguja lentamente una vez que se hayan inyectado las células madre. Termine el procedimiento calentando al cachorro con las manos hasta que comience a moverse antes de devolvérselo a la madre.