Name: Optimización rápida de un sistema inducible por luz para controlar la expresión génica de mamíferos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Aprende a optimizar la expresión génica inducible por luz en células HEK293T usando la herramienta optogenética LACE. Este método de alto rendimiento mejora el control de la expresión en mamíferos.

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<table><tbody><tr><td>Tubos microcentrífugas de 1,5 mL</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>Reservorios de reactivos de 10 mL</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas de 10 mL</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 y mu; Puntas del filtro en L</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL&nbsp; Tubos de centrifugadora de alto rendimiento, tapa plana</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de potencia óptica 1931-C</td><td>Newport</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>2 mL de pipetas serológicas</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 & mu; Puntas del filtro en L</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu; Puntas del filtro en L</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>Tubos centrífugos de alto rendimiento de 50 mL, tapa plana</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>Placas en V de 96 pozos</td><td>MARCAplacas</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, bombilla LED roja</td><td>Bombillas Bluex</td><td>N/A</td><td>Fuente de luz roja</td></tr><tr><td>Arduino IDE Software</td><td>Arduino</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Gabinete de Bioseguridad, Clase II</td><td>NuAire</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hemocitometro de línea brillante</td><td>Hausser Scientific</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>Diapositivas de conteo de células</td><td>BioRad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular de 96 pozos, placa inferior de vidrio #1,5H</td><td>Cellvis</td><td>P96-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert Software</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Fluorosferas de control de calidad diarias listas para usar CytoFLEX</td><td>Beckman Coulter</td><td>C65719</td><td>4 & deg; C</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo CytoFLEX-S (4 canales violetas, 2 azules, 4 amarillos verdes, 3 rojos)</td><td>Beckman Coulter</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>Polvo salino tamponado con fosfato de Dulbecco, sin calicum, sin magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>21600069</td><td>Temperatura ambiente</td></tr><tr><td>Centrífuga Eppendorf 5804</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; 022622501</td><td>Paso de centrífuga con placa inferior en V</td></tr><tr><td>Centrífuga Eppendorf 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, 8 canales, volumen variable, 30 - 300 y mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, canal único, volumen variable, 100 - 1000 & mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, monocanal, volumen variable, 2 - 20 y mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, canal único, volumen variable, 20 - 200 y mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de etiquetado de laboratorio de uso general</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>DMEM gibco, polvo, glucosa alta</td><td>Fisher Scientific</td><td>12100061</td><td>4 & deg; C</td></tr><tr><td>Solución azul de Gibco Trypan, 0,4%</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-250-061</td><td>Temperatura ambiente</td></tr><tr><td>Gibco Value Heat Inactivated FBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>A5256901</td><td>-20 y grados; C</td></tr><tr><td>Gibco, Tripsina-EDTA (0,05%), con EDTA, Origen Animal, 1X, Fenol Rojo, 500 mL</td><td>Gibco</td><td>25300062</td><td>-20 y grados; C</td></tr><tr><td>HEK293T Células</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 ºC; C, nitrógeno líquido</td></tr><tr><td>Marcadores de laboratorio, Micronova</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>Lámpara de escritorio metálica</td><td>Diseños sencillos</td><td>N/A</td><td>Lámpara para luz roja</td></tr><tr><td>OptoPlate-96</td><td>LABmaker</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>XP de ayuda de biseta</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Plásmido: CIBN-gRNA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 y grados; C</td></tr><tr><td>Plásmido: CMV-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 y grados; C</td></tr><tr><td>Plásmido: CRY2-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 y grados; C</td></tr><tr><td>Reactivo de transfección in vitro de ADN PolyJet</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1536117</td><td>4 & deg; C</td></tr><tr><td>Matraz de cultivo celular T-75</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de CO<2/sub> con chaqueta de agua</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

optimización rápida de un sistema inducible por luz para controlar la expresión génica de mamíferos

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Optimización rápida de un sistema inducible por luz para controlar la expresión génica de mamíferos

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Este video muestra el sistema de expresión génica de tetraciclina, o Tet-On, en un modelo de ratón. En presencia de doxiciclina, un derivado de la tetraciclina, el sistema Tet-On que consiste en una proteína transactivadora controlada por tetraciclina inversa se activa y expresa el gen de interés.

Expresión génica inducible basada en el sistema regulable por Tet-On in vivo: un sistema de expresión génica inducido por tetraciclina para la activación de la transcripción de genes diana en un modelo de ratón

Este protocolo describe un procedimiento experimental para la construcción rápida de factores de transcripción artificiales (ATFS) con GFP reporteros afines y cuantificación de la capacidad de los ATF para estimular la expresión de GFP mediante citometría de flujo.

Síntesis rápida y Detección de factores de transcripción activados químicamente con los periodistas basados ​​en las buenas prácticas agrarias

El método descrito aquí se utiliza para inducir la cascada de señalización apoptótica en pasos definidos con el fin de diseccionar la actividad de una proteína efectora bacteriana antiapoptótica. Este método también se puede utilizar para la expresión inducible de proteínas proapoptóticas o tóxicas, o para diseccionar la interferencia con otras vías de señalización.

La aplicación de un sistema de expresión inducible para el Estudio de la interferencia de los factores de virulencia bacteriana con Señalización Intracelular

Este protocolo describe una estrategia optogenética para modular la actividad de la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK) durante la diferenciación celular y el desarrollo embrionario de Xenopus . Este método permite la activación reversible de la vía de señalización MAPK en el cultivo de células de mamíferos y en organismos vivos multicelulares, como los embriones Xenopus , con alta resolución espacial y temporal.

Modulación reversible mediada por luz de la vía de la proteína quinasa activada por mitógeno durante la diferenciación celular y<em&gt; Xenopus</em&gt; Desarrollo embrionario

Aquí, presentamos un protocolo para analizar la transferencia de célula a célula de información oscilatoria por control optogenetic y control de la expresión génica en vivo. Este enfoque proporciona una plataforma única para probar una significación funcional de los programas de dinámica gene expresión en sistemas multicelulares.

Un método de Optogenetic para controlar y analizar patrones de expresión génica en las interacciones célula a célula

Este protocolo describe los pasos necesarios para generar un modelo de sistema en que se puede regular la transcripción de un gen endógeno de interés condicional en animales vivos o células con mayor lac represor y tet activador de sistemas.

Aplicación in vivo del sistema de control remoto para la manipulación de genes endógenos

El control fiable de las células de mamíferos sensibles a la luz requiere la estandarización de los métodos optogenéticos. Hacia este objetivo, este estudio describe una línea de construcción de circuitos genéticos, ingeniería celular, operación de equipos optogenéticos y ensayos de verificación para estandarizar el estudio de la expresión génica inducida por la luz utilizando un circuito genético optogenético de retroalimentación negativa como estudio de caso.

Ingeniería confiable y control de circuitos genéticos optogenéticos estables en células de mamíferos

La optogenética es una herramienta poderosa con una amplia gama de aplicaciones. Este protocolo demuestra cómo lograr la expresión génica inducible por la luz en embriones de pez cebra utilizando el sistema TAEL/C120 sensible a la luz azul.

Expresión de GFP inducida por la luz en embriones de pez cebra utilizando el sistema optogenético TAEL/C120

La luz de bioluminiscencia emitida por una enzima luciferasa que oxida un sustrato de molécula pequeña, una luciferina, se puede aprovechar para activar proteínas fotosensoriales, agregando así otra dimensión a la estimulación de la luz y permitiendo la manipulación de una multitud de funciones mediadas por la luz en las células a través de escalas temporales y espaciales.

Optogenética bioluminiscente 2.0: Aprovechamiento de la bioluminiscencia para activar proteínas fotosensoriales in vitro e in vivo

El control optogenético del metabolismo microbiano ofrece un control dinámico flexible sobre los procesos de fermentación. El protocolo aquí muestra cómo configurar fermentaciones reguladas por luz azul para la producción química y de proteínas a diferentes escalas volumétricas.

Fermentaciones controladas por la luz para la producción química microbiana y de proteínas

Este protocolo describe la aplicación de un dominio de interruptor alostérico activado por luz azul (LightR) para el control espacio-temporal reversible de la actividad de las proteínas. Utilizando la tirosina quinasa Src como modelo, este estudio ofrece un protocolo elaborado para desarrollar y caracterizar Src regulado por luz (LightR-Src). Demuestra la versatilidad de este enfoque en todas las clases de enzimas.

Control espacio-temporal de la actividad proteica a través de la regulación alostérica optogenética

Aprende a optimizar la expresión génica inducible por luz en células HEK293T usando la herramienta optogenética LACE. Este método de alto rendimiento mejora el control de la expresión en mamíferos.

Optimización rápida de un sistema inducible por luz para controlar la expresión génica de mamíferos

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