Name: Ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa CRISPR/Cas12a para detectar Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza tropical 4 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T13:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Aprende a detectar Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza tropical 4 mediante un ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa y CRISPR/Cas12a. Este método rápido y económico mejora la precisión diagnóstica en patología vegetal.

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<ol><li>Viljoen, A., Ma, L. J., Molina, A. B. Fusarium Wilt (Panama Disease) and Monoculture in Banana Production: Resurgence of a Century-Old Disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aViljoen%2C+A+%22Emerging+Plant+Diseases+and+Global+Food+Security%22">Emerging Plant Diseases and Global Food Security</a>. , The American Phytopathological Society. St. Paul, MN. (2020).</li>
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<li>Zhang, Y. M., Zhang, Y., Xie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+CRISPR%2FCas12a-based+DNA+detection+for+fast+pathogen+diagnosis+and+GMO+test+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Breed%22%5BJournal%5D)">Evaluation of CRISPR/Cas12a-based DNA detection for fast pathogen diagnosis and GMO test in rice.</a> Mol Breed. 40 (1), 11(2020).</li>
<li>Wang, Q., Qin, M., Coleman, J. J., Shang, W., Hu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+Verticillium+dahliae+from+complex+samples+using+CRISPR%2FCas12a+technology+combined+with+RPA%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of Verticillium dahliae from complex samples using CRISPR/Cas12a technology combined with RPA.</a> Plant Dis. 107 (6), 1664-1669 (2023).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+two+fungal+pathogens+in+soybeans+using+the+recombinase+polymerase+amplification%2FCRISPR-Cas12a+method+for+potential+on-site+disease+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of two fungal pathogens in soybeans using the recombinase polymerase amplification/CRISPR-Cas12a method for potential on-site disease diagnosis.</a> Pest Manag Sci. 80 (3), 1168-1181 (2024).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+frontline%2C+rapid%2C+nucleic+acid-based+Fusarium+circinatum+detection+system+using+CRISPR%2FCas12a+combined+with+recombinase+polymerase+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">A frontline, rapid, nucleic acid-based Fusarium circinatum detection system using CRISPR/Cas12a combined with recombinase polymerase amplification.</a> Plant Dis. 107 (6), 1902-1910 (2023).</li>
<li>Mu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a-based+diagnostics+of+wheat+fungal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a-based diagnostics of wheat fungal diseases.</a> J Agric Food Chem. 70 (23), 7240-7247 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+detection+of+Fusarium+temperatum+by+using+CRISPR-Cas12a+empowered+LAMP+assay+coupled+with+AuNPs-based+colorimetric+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22LWT%22%5BJournal%5D)">Visual detection of Fusarium temperatum by using CRISPR-Cas12a empowered LAMP assay coupled with AuNPs-based colorimetric reaction.</a> LWT. 185, 115190(2023).</li>
<li>Liang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+RPA-based+CRISPR%2FCas12a+assay+in+combination+with+a+lateral+flow+strip+for+rapid+detection+of+toxigenic+Fusarium+verticillioides+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Development of an RPA-based CRISPR/Cas12a assay in combination with a lateral flow strip for rapid detection of toxigenic Fusarium verticillioides in maize.</a> Food Control. 157, 110172(2024).</li>
<li>Matthews, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combined+recombinase+polymerase+amplification+CRISPR%2FCas12a+assay+for+detection+of+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+tropical+race+4%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A combined recombinase polymerase amplification CRISPR/Cas12a assay for detection of Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4.</a> Sci Rep. 15 (1), 2436(2025).</li>
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<li>Blomme, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+diseases+of+bananas+and+enset%3A+Current+state+of+knowledge+and+integrated+approaches+toward+sustainable+management%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Bacterial diseases of bananas and enset: Current state of knowledge and integrated approaches toward sustainable management.</a> Front Plant Sci. 8, 1290(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Proteína EnGen Lba Cas12a (Cfp1)</td><td>New England Biolabs</td><td>M0653T</td><td></td></tr><tr><td>Diluyente EnGen Lba Cas12a</td><td>New England Biolabs</td><td>B0653A</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de PCR de Eppendorf</td><td>Merck</td><td>EP0030124332</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ensayo micro con bloqueo Eppendorf</td><td>Merck</td><td>EP0030121708</td><td></td></tr><tr><td>Bolsas de extracción universales</td><td>BIOREBA</td><td>430100</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 100 pb Escalera de ADN</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>SM0241 / SM0242</td><td></td></tr><tr><td>Mini-6KO Genie Centrifugadora</td><td>OptiGene</td><td>OP-FUGE</td><td></td></tr><tr><td>Genie III</td><td>OptiGene</td><td>https://www.optigene.co.uk/instruments/genie-iii/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Portatiras Genie</td><td>OptiGene</td><td>GBLOCK-01 / GBLOCK-02 / GBLOCK-03</td><td></td></tr><tr><td>Tiras Genie</td><td>OptiGene</td><td>OP-0008-50 / OP-0008-500</td><td></td></tr><tr><td>Kit de síntesis de ARN de alto rendimiento HiScribe T7</td><td>New England Biolabs</td><td>E2040S</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro NanoDrop ND-1000 UV/Vis</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>https://caeonline.com/buy/spectrometers/nanodrop-nd-1000/293669253</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3</td><td>New England Biolabs</td><td>B7003S</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer r2.1</td><td>New England Biolabs</td><td>B6002S</td><td></td></tr><tr><td>Polvo de polivinilipirrolidona (PVP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9003-39-8</td><td></td></tr><tr><td>Kit de limpieza y concentrador de ARN 5</td><td>Zymo Research</td><td>R1013</td><td></td></tr><tr><td>Tinte de carga de ARN</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>R0641</td><td></td></tr><tr><td>Transiluminador SmartBlue Blue Light</td><td>Instrumentos Accuris</td><td>E4000-E</td><td></td></tr><tr><td>Pellets de hidróxido de sodio (NaOH)</td><td>Merck, EMPARTA</td><td>K277</td><td></td></tr><tr><td>Tris (hidroximetil) aminometano</td><td>Merck</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>Kit Básico de Líquido TwistAmp</td><td>TwistDx</td><td>TALQBAS01</td><td></td></tr></tbody></table>

ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa crispr/cas12a para detectar fusarium oxysporum f. sp. cubense raza tropical 4

Combined Recombinase Polymerase Amplification CRISPR/Cas12a Assay for Detecting Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

Ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa CRISPR/Cas12a para detectar Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza tropical 4

Regular and accurate surveillance stands central to the efficient management of plant diseases. It can indicate which course of action is most ...

combined-recombinase-polymerase-amplification-crisprcas12a-assay-for

Research

JoVE Journal

Environment

Usando el montaje de ADN, múltiples vectores de CRISPR pueden ser construidos en paralelo en una única reacción de clonación, por lo que la construcción de un gran número de vectores de CRISPR una tarea simple. Tomate raíces peludas son un excelente sistema modelo para validar vectores de CRISPR y generar materiales mutantes.

De alto rendimiento CRISPR vector de la construcción y caracterización de las modificaciones del ADN mediante la generación de raíces peludas tomate

Se describe una sólida estrategia de sustitución de genes para manipular genéticamente el hongo Ustilago maydis carbón. Este protocolo explica cómo generar mutantes de deleción para investigar fenotipos de infección. Se puede extender para modificar genes de cualquier manera deseada, por ejemplo, mediante la adición de una secuencia que codifica un marcador de proteína fluorescente.

La manipulación genética del patógeno de la planta<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; Estudiar biología de hongos y plantas Microbe Interactions

Aquí, presentamos un método para diseñar el genoma de C. elegans utilizando ribonucleoproteínas Cas9 CRISPR y plantillas de reparación dependiente de homología.

Un rápido y fácil tubería para generar genómica punto mutantes de C. elegans utilizando CRISPR/Cas9 ribonucleoproteínas

El objetivo de este protocolo es permitir la edición CRISPR/Cas9 sin fisuras del genoma de C. elegans utilizando complejos de ribonucleoproteína ensamblados y el marcador co-CRISPR dpy-10 para el cribado. Este protocolo se puede utilizar para realizar una variedad de modificaciones genéticas en C. elegans, incluidas inserciones, deleciones, reemplazos de genes y sustituciones de codones.

CRISPR/Cas9 Edición del gen C. elegans rbm-3.2 utilizando el marcador de detección co-CRISPR dpy-10 y complejos de ribonucleoproteína ensamblados.

En este trabajo, se desarrolló un método de detección rápido, sensible y portátil para Candidatus Liberibacter asiaticus basado en la amplificación de la polimerasa recombinasa combinada con CRISPR-Cas12a.

Detección de Candidatus Liberibacter asiaticus desplegable en campo mediante amplificación de polimerasa recombinasa combinada con CRISPR-Cas12a

Los sistemas CRISPR-Cas y las proteínas anti-CRISPR se integraron en el esquema de puertas booleanas en Saccharomyces cerevisiae. Los nuevos circuitos lógicos pequeños mostraron un buen rendimiento y profundizaron la comprensión de los factores de transcripción basados en dCas9 / dCas12a y las propiedades de las proteínas anti-CRISPR.

Circuitos digitales genéticos basados en sistemas CRISPR-Cas y proteínas anti-CRISPR

Presentamos un protocolo que combina la amplificación de la polimerasa recombinasa con un sistema CRISPR/Cas12a para la detección de trazas de virus de ADN y construye una microscopía portátil para teléfonos inteligentes con una clasificación asistida por inteligencia artificial para la detección de virus de ADN en el punto de atención.

Sistema de detección de virus de ADN basado en RPA-CRISPR/Cas12A-SPM y Deep Learning

Aquí, presentamos la preparación paso a paso de la amplificación isotérmica premezclada basada en recombinasa liofilizada y reacciones basadas en repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR), que se pueden utilizar para la detección de biomarcadores de ácidos nucleicos de patógenos de enfermedades infecciosas u otros marcadores genéticos de interés.

Diagnóstico basado en CRISPR en el punto de atención con reactivos premezclados y liofilizados

Para facilitar la detección rápida y precisa de Acinetobacter baumannii, presentamos un protocolo que emplea la amplificación de la polimerasa recombinasa (RPA) junto con la endonucleasa LbaCas12a para identificar infecciones por A. baumannii .

Detección rápida y específica de infecciones por Acinetobacter baumannii mediante un sistema de amplificación de polimerasa recombinasa/Cas12A

Aquí, describimos un procedimiento simple y rápido para detectar ADN de patógenos de abejas, como Lotmaria passim y Nosema ceranae, utilizando una lisis celular lista para la amplificación, amplificación de polimerasa recombinasa y ensayos CRISPR/Cas12a.

Detección in situ de ADN de parásitos tripanosomátidos y Nosema ceranae mediante lisis alcalina acoplada al sistema RPA/CRISPR/Cas12a

Aprende a detectar Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza tropical 4 mediante un ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa y CRISPR/Cas12a. Este método rápido y económico mejora la precisión diagnóstica en patología vegetal.

Ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa CRISPR/Cas12a para detectar Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza tropical 4 (Video) | JoVE Journal

Ensayo combinado de amplificación de polimerasa recombinasa CRISPR/Cas12a para detectar Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza tropical 4

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