Name: Aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Aprende a aislar células madre adiposas de tejido porcino mediante digestión enzimática y disociación mecánica con ondas. Este protocolo reduce el tiempo de procesamiento a 30 minutos y mejora la viabilidad celular hasta el 95%.

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<ol><li>Qin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%3A+where+challenge+meets+opportunity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci%22%5BJournal%5D)">An update on adipose-derived stem cells for regenerative medicine: where challenge meets opportunity.</a> Adv Sci. 10 (20), 1-27 (2023).</li>
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<li>Liu, Y., Zhao, H., Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+laboratory-based+strategy+for+single+adipocyte+and+adipose-derived+stem+cells+extraction+for+transplantation%3A+an+experimental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Aesthet+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">A novel laboratory-based strategy for single adipocyte and adipose-derived stem cells extraction for transplantation: an experimental research.</a> Aesthet Plast Surg. 49, 367-379 (2025).</li>
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<table><tbody><tr><td>Kit de Disociación de Tejidos Tipo A</td><td>Docsense</td><td>TM001</td><td>Contiene el agente de disociación tisular tipo A (solución tipo A) y el tampón de disociación tisular tipo A (buffer A).</td></tr><tr><td>Kit de Medio de Diferenciación Adipogénica</td><td>OriCell</td><td>GUXMD-90031</td><td>Utilizado para la diferenciación adipogénica, incluyendo el medio modificado de Eagle's de Dulbecco (sin modificar) y el medio de mantenimiento de alta glucosa</td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>OriCell</td><td>A5533ALIR-10001</td><td>Tinción mineralizada para diferenciación osteogénica (pH 5,2)</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td>Ácido L-ascórbico, cultivo celular analizado, para inducción osteogénica</td></tr><tr><td>Bama minipigs</td><td>Chengdu Dossy Animales Experimentales Co., Ltd</td><td></td><td>Animales machos de un año, de grado SPF, mantenidos bajo procedimientos estandarizados de vacunación, desparasitación y limpieza.https://www.cd-dossy.cn/animalpl_detail/12606067609851863 04.html</td></tr><tr><td>Contador Automático de Celdas Bio-Rad TC20</td><td>Laboratorios Bio-Rad</td><td>1450011</td><td>Contador de celdas automatizado para la viabilidad y la evaluación de rendimiento</td></tr><tr><td>PEDY</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3922</td><td>Tinte lipídico neutro</td></tr><tr><td>BSA (5%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>Albúmina sérica bovina, polvo liofilizado, para bloquear</td></tr><tr><td>Calcitriol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9756</td><td>1&alfa, 25-Dihidroxivitamina D3, para inducción osteogénica</td></tr><tr><td>Tamiz celular (70 y mu; m)</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>Falcon 70 y mu; Colador de células m, estéril, para la preparación de muestras FACS</td></tr><tr><td>Filtro celular (200 y mu; m)</td><td>pluriSelect</td><td>43-50200-03</td><td>pluriScolador, malla PET, encaja en tubos de 50 mL, estéril y nbsp;</td></tr><tr><td>tubo centrífuga (50 mL)</td><td>Corning</td><td>352098</td><td>Falcon 50 mL tubo cónico de alta claridad, estéril, polipropileno</td></tr><tr><td>Corredera de conteo (para Bio-Rad TC20)</td><td>Laboratorios Bio-Rad</td><td>1450011</td><td>Portaobjetos de conteo de doble cámara para contador automático de celdas TC20 y nbsp;</td></tr><tr><td>plato de cultivo (100 mm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Plato de poliestireno estéril, para formación de organoides en gotas colgantes</td></tr><tr><td>Dexametasona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td>&ge; 98%, para inducción adipogénica y osteogénica</td></tr><tr><td>Solución salina balanceada de D-Hanks o PBS</td><td>Gibco</td><td>10010015</td><td>Preenfriado a 4 °F; C, pH 7,4.</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965084</td><td>Se utiliza para el cultivo de SVF aislado y fresco</td></tr><tr><td>DNasa I</td><td>Beyotime</td><td>D7073</td><td>Opcional, recomendado si se observa agrupamiento.</td></tr><tr><td>etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td>75% para desinfección superficial.</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>A4736201</td><td>Sistema Tet aprobado, origen estadounidense, estéril y nbsp;</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo</td><td>BD Biociencias</td><td>BD FACSCanto II</td><td>3 láseres (405 nm, 488 nm, 633 nm), 8 canales de fluorescencia, para análisis de marcadores superficiales (CD73, CD90, CD11b, CD45), se encuentra con 70 <img alt="Ecuación 1" src="/files/ftp_upload/70464/70464eq1.jpg" style="margin: auto; "/>m requisito de tobera a 20 psi</td></tr><tr><td>microscopio de fluorescencia</td><td>Olimpo</td><td></td><td>Modelo invertido o vertical capaz de sistemas de filtros FITC y DAPI.</td></tr><tr><td>Anticuerpos secundarios fluorescentes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001 (anti-ratón), A-11008 (anti-conejo)</td><td>Alexa Fluor conjugado, para inmunofluorescencia</td></tr><tr><td>Anticuerpos conjugados con fluorocromo (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD Biociencias</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>Para el análisis citométrico de flujo del fenotipo ADSC</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Tinción nuclear para evaluación de células vivas/muertas.</td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5879</td><td>&ge; 99% (HPLC), para medio de inducción adipogénica</td></tr><tr><td>Solución fisiológica estéril helada</td><td>Baxter</td><td>2F7124</td><td>Inyección de cloruro de sodio al 0,9%, USP, para enjuague tejido</td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Recombinante, expresado en levaduras, para inducción adipogénica</td></tr><tr><td>Iodóforo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25104</td><td>Solución desinfectante al 2%.</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>Factor de crecimiento reducido, sin fenol rojo, para incrustar esferoides y nbsp;</td></tr><tr><td>Baño de Metal</td><td>Servicebio</td><td>SMB-H</td><td>Se usa para incubación a 37 °C.</td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>OriCell</td><td>OILR-10001</td><td>Tinción lipídica para diferenciación de adipocitos</td></tr><tr><td>Microscopio óptico</td><td>Olimpo</td><td></td><td>Microscopio estándar de campo claro con 10x y guion guion; 40x objetivos.</td></tr><tr><td>Kit de medio de diferenciación osteogénica</td><td>OriCell</td><td>GUXMD-90021</td><td>Utilizado para la diferenciación osteogénica, incluyendo el medio modificado de Dulbecco (sin modificar) y el medio de mantenimiento de alta glucosa</td></tr><tr><td>Pipeta P1000 con puntas de ánimo ancho</td><td>Beckman Coulter</td><td>B01113</td><td>Biomek P1000 Span-8 con puntas de ánimo, estériles</td></tr><tr><td>Paraformaldehído (4%)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899</td><td>Solución acuosa, para fijar organoides &nbsp;</td></tr><tr><td>Pasteur Pipette</td><td>Corning</td><td>7095S-5C</td><td>Estéril, desechable.</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>10.000 U/mL de penicilina, 10.000 y mu; g/mL estreptomicina, estéril y nbsp;</td></tr><tr><td>Pentobarbital sódico</td><td>Hikma Pharmaceuticals USA Inc.</td><td>24201-010-20</td><td>Inyectable, para eutanasia (100 mg/kg de peso corporal, intravenosa). ANDA 203619 y nbsp;</td></tr><tr><td>Anticuerpos primarios (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD Biociencias</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>Para la inmunotinción organoide</td></tr><tr><td>Amortiguador de Lisis de Glóbulos Rojos (RBC)</td><td>Solarbio</td><td>R1010</td><td>Si es necesario para aplicaciones posteriores.</td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada</td><td>Eppendorf</td><td>5702R</td><td>Se utiliza para pasos de centrifugación a 4 °C.</td></tr><tr><td>Rosiglitazona</td><td>Cayman Chemical</td><td>71740</td><td>&ge; 98%, PPAR y gamma; agonista para inducción adipogénica</td></tr><tr><td>Contenedor de objetos punzantes</td><td>Becton Dickinson</td><td>305270</td><td>Recipiente resistente a pinchazos para cuchillas y tijeras usadas</td></tr><tr><td>Sistema de preparación de suspensión de celda única SoniConvert</td><td>Docsense</td><td>SC-L1W</td><td>Se utiliza para la disociación mecánica de tejidos.</td></tr><tr><td>Amortiguador de tinción (Buffer de tinción por citometría de flujo)</td><td>eBiociencia (Thermo Fisher Scientific)</td><td>00-4222-57</td><td>200 mL, listo para usar, contiene FBS y azida de sodio al 0,09% como conservante, para dilución de anticuerpos y células, tinción superficial y pasos de lavado en citometría de flujo &nbsp;</td></tr><tr><td>Tubo Eppendorf estéril de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121.517</td><td>Tubo microcentrífuga Safe-Lock, estéril, para la picada de tejidos</td></tr><tr><td>Plato de cultivo estéril</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Plato de cultivo estéril de 100 mm x 20 mm, para recogida de tejidos</td></tr><tr><td>Pinzas estériles</td><td>Sklar</td><td>96-1719</td><td>Pinzas estériles para el pulgar, dentadas, para el manejo de tejidos y nbsp;</td></tr><tr><td>Gasa estéril</td><td>Corporación de Dukal</td><td>7060033</td><td>Almohadillas de gasa estériles, para desinfección y limpieza</td></tr><tr><td>Tijeras oftálmicas estériles</td><td>Sklar</td><td>10023-580</td><td>Tijeras de resorte estilo Vannas, para picar tejido en 1-2 mm y sobre3; Piezas</td></tr><tr><td>Afeitadora estéril</td><td>3M</td><td>9681</td><td>Afeitadora de preparación quirúrgica, para la depilación del área operatoria</td></tr><tr><td>Bisturí estéril</td><td>Integra Miltex</td><td>4-415</td><td>Bisturí estéril desechable, para hacer incisiones</td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas estériles</td><td>Sklar</td><td>10022-580</td><td>Tijeras de Iris Estériles Merit, para diseccionar vasos sanguíneos y tejido conectivo&nbsp;</td></tr><tr><td>Matraz de cultivo celular T25</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Matraz de cultivo de células Falcon T25, tapa ventilada, estéril</td></tr><tr><td>Triton X-100 (0,1%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Grado de laboratorio, para permeabilización y nbsp;</td></tr><tr><td>Trippan Blue</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>Solución del 0,4% para el recuento de viabilidad celular.</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>0,25% tripsina, 1 mM de EDTA, para desprender ADSC</td></tr><tr><td>&beta;-Glicerfosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422</td><td>Sal disódica pentahidratada, para inducción osteogénica</td></tr></tbody></table>

aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino

Efficient Isolation of Adipose-derived Stem Cells and Adipocytes from Porcine Adipose Tissue

Aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino

Adipose-derived stem cells (ADSCs) have emerged as ideal seed cells in regenerative medicine due to their abundant sources, minimally invasive harvesting, ...

efficient-isolation-adipose-derived-stem-cells-adipocytes-from

Research

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Biology

Este video demuestra una técnica para aislar y cultivar células madre adiposas (ADSC) derivadas de la cresta neural marcadas con fluorescencia a partir de tejido adiposo del arco periaórtico murino. Tras el aislamiento, las NCADSC se detectan, se clasifican mediante la clasificación celular activada por fluorescencia y, posteriormente, se cultivan en una placa, lo que promueve la proliferación celular.

Aislamiento de células madre derivadas del tejido adiposo periaórtico murino

En 2001, investigadores de la UCLA describen el aislamiento de una población de células madre adultas, denominada células madre o las ASC derivadas de tejido adiposo, a partir de tejido adiposo. En este artículo se describe el aislamiento de las ASC de lipoaspirates utilizando un protocolo de digestión manual, enzimática utilizando colagenasa.

Aislamiento Manual de células madre derivadas de tejido adiposo de Lipoaspirates Humanos

Este protocolo describe el aislamiento de células madre derivadas del tejido adiposo de cerdo (pADSC) de tejidos adiposos subcutáneos con examen de multipotencia. Los pADSC multipotentes se utilizan para delinear procesos de diferenciación de adipocitos y estudiar la transdiferenciación en múltiples linajes celulares de mesénquima mesodérmico o linajes adicionales de ectodermo y endodermo para estudios regenerativos.

El aislamiento y la diferenciación de células madre derivadas de tejido adiposo subcutáneo de la especie porcina tejidos adiposos

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

Presentamos un método simple para aislar células progenitoras adiposas altamente viables de las almohadillas de grasa epidídmica del ratón usando clasificación celular activada por fluorescencia.

Preparación de células progenitoras adiposas de tejidos adiposos epidídicos del ratón

Presentamos un método de inyección celular a través de la tecnología de chorro de agua sin aguja junto con una secuela de investigaciones posteriores a la entrega en términos de mediciones de viabilidad celular, proliferación y elasticidad.

Inyección de células del estroma derivadas del tejido adiposo porcino a través de la tecnología de chorro de agua

Las células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo (Ad-MSC) pueden ser una fuente potencial de MSC que se diferencian en células productoras de insulina (IPC). En este protocolo, proporcionamos pasos detallados para el aislamiento y la caracterización de las MSC Ad-MSC epidídimas de ratas, seguidas de un protocolo simple y corto para la generación de IPC a partir de las mismas MSC Ad-MSC de ratas.

Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido adiposo de rata para la diferenciación en células productoras de insulina

Este protocolo describe una metodología para aislar e identificar células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo (MSC) de ratas Sprague Dawley.

Aislamiento e identificación de células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo de ratas Sprague Dawley

Este protocolo describe el aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal (SVF) del tejido adiposo murino para obtener preadipocitos y lograr la diferenciación de los adipocitos in vitro. El uso de un disociador de tejidos para la digestión de la colagenasa reduce la variación experimental y aumenta la reproducibilidad.

Aislamiento semiautomático de la fracción vascular estromal del tejido adiposo blanco murino utilizando un disociador tisular

Hemos identificado la placenta como un órgano principal hematopoyéticas durante el desarrollo. Encontramos que las células madre hematopoyéticas (HSC), son generados y ampliado en la placenta en el único nichos microambientales. A continuación, describimos las técnicas experimentales necesarias para el aislamiento y la visualización de la CMH en la placenta del ratón.

Aislamiento y análisis de las células madre hematopoyéticas de la placenta

Aprende a aislar células madre adiposas de tejido porcino mediante digestión enzimática y disociación mecánica con ondas. Este protocolo reduce el tiempo de procesamiento a 30 minutos y mejora la viabilidad celular hasta el 95%.

Aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino

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