Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiology
0 vues • 2:25 min • August 29th, 2025
Commencer par des souches bactériennes pathogènes cultivées sur des plaques de gélose séparées.
Chaque souche porte différentes mutations dans les gènes responsables de la production d’une capsule, une couche protectrice de polysaccharides.
Transférez les colonies individuelles des plaques dans des tubes séparés contenant un milieu liquide riche en nutriments et incuber.
Pendant l’incubation, les bactéries entrent dans la phase de croissance exponentielle et expriment les gènes producteurs de capsules.
Les mutations dans ces gènes entraînent des variations dans la production de capsules, générant des cellules non capsulées, faiblement capsulées et fortement capsulées.
Transférez les cultures et centrifugez-les pour granuler les cellules.
Les cellules non capsulées et faiblement capsulées forment des granules denses, tandis que les celluloïds fortement capsulés,
en raison de leur couche de capsule hydratée, forment une granule moins dense.
Retirez soigneusement le surnageant pour éviter de perdre les cellules fortement capsulées.
Ajoutez un tampon, centrifugez à nouveau et jetez le surnageant pour éliminer le milieu résiduel.
Remettez les cellules en suspension dans le tampon pour stabiliser les bactéries sans favoriser la croissance, préservant ainsi la structure de la capsule.
Sélectionnez une seule colonie dans une assiette de bouillon avec une boucle stérile et inoculez 10 millilitres d’un bouillon approprié.
Incuber la culture pendant la nuit. Transférez ensuite la culture dans un tube de 15 millilitres et centrifugez. Ensuite, jetez le surnageant et remettez la pastille en suspension dans deux millilitres de PBS.
Répétez la centrifugation et jetez le surnageant obtenu. Remettez ensuite le granulé en suspension dans deux millilitres de PBS.