Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiology
0 vues • 2:17 min • August 29th, 2025
Commencez avec un tube contenant un gradient de densité discontinu prédéfini, préparé à l’aide de particules de silice colloïdale non toxiques enrobées de polyvinylpyrrolidone.
Le dégradé comprend trois couches non superposées, disposées par ordre croissant de densités de haut en bas.
Prenez une banque de mutants de transposons bactériens, une suspension groupée de souches bactériennes avec des mutations aléatoires induites par des transposons.
Un sous-ensemble de ces mutations perturbe les gènes qui régulent la capsule, une couche de polysaccharides entourant la paroi cellulaire bactérienne, ce qui donne des souches avec des quantités variables de capsules.
Ajoutez la bibliothèque bactérienne en haut du dégradé très lentement, sans mélanger l’interface.
Centrifugez le tube à une vitesse modérée.
Le gradient facilite la migration différentielle des bactéries en fonction de la quantité de leurs capsules.
Les souches hyper-capsulées, moins denses en raison de leur couche de polysaccharides hydratée, se localisent près du sommet.
Les souches faiblement capsulées s’installent au milieu, et les souches non capsulées et plus denses migrent vers le bas.
Les souches bactériennes séparées sont prêtes pour l’analyse en aval.
Ajoutez soigneusement 600 microlitres des cellules préparées au sommet du gradient dans le tube. Placez ensuite le tube dans un adaptateur de tube et pesez le tube avec l’adaptateur pour assurer l’équilibre. Après cela, placez l’adaptateur de tube dans un rotor à angle fixe à l’intérieur d’une centrifugeuse de paillasse, et centrifugez le tube pendant 30 minutes à 3 000 g.
Enfin, après la centrifugation, retirez soigneusement le tube, placez-le dans un support et photographiez les résultats.