Essai d’essaimage pour la visualisation de la motilité de surface bactérienne

Commencez avec un tube contenant des bactéries mobiles qui expriment une protéine fluorescente verte.

À l’aide d’une aiguille, placez les bactéries sur une plaque de gélose nutritive molle pour étudier la motilité de surface des bactéries.

Ensuite, retournez la plaque pour éviter la condensation de l’eau à la surface de la gélose.

Incuber la plaque pour permettre aux bactéries de se développer.

Au fur et à mesure que l’incubation progresse, les bactéries utilisent leurs flagelles pour initier la migration vers l’extérieur à partir du point d’inoculation.

Une fois l’incubation terminée, ouvrez le couvercle et placez la plaque inversée dans un système d’imagerie, avec la face gélose face au détecteur optique, pour assurer une imagerie précise.

Placez le couvercle rempli d’eau au-dessus de l’assiette. Scellez-le pour maintenir un environnement humide.

Fermez le système d’imagerie et lancez l’acquisition d’images en accéléré.

Au fil du temps, la migration bactérienne génère des projections en forme de doigts verts appelées vrilles. Ces structures bactériennes s’étendent vers l’extérieur à partir du point d’inoculation central, confirmant la motilité de surface bactérienne.

Inoculez un à cinq microlitres de la culture de nuit sur les plaques de gélose en essaim séchées en piquant la surface de la gélose avec un cure-dent stérile ou une aiguille d’inoculation, selon la souche bactérienne, transférez les plaques de test en essaim dans un incubateur avec une température réglée à 30 degrés Celsius, 37 degrés Celsius ou 42 degrés Celsius. Inversez les plaques de manière à ce que l’excès d’humidité se condense sur le couvercle de la plaque et non sur la gélose, équilibrez les bactéries à des températures spécifiques à la souche pendant deux ou quatre heures juste avant l’imagerie en accéléré.

Ensuite, transférez les plaques dans l’unité d’imagerie in vivo de sorte que les bactéries à la surface de la gélose soient orientées vers le bas vers la caméra inversée de l’unité. Remplissez tous les couvercles de boîtes de Pétri avec une petite quantité d’eau. Placez ensuite chaque couvercle avec le côté de l’eau vers le haut sur les plaques de gélose inversées.

À l’intérieur de l’unité d’imagerie, scellez le boîtier d’imagerie pour maintenir un niveau d’humidité constant, ajustez les paramètres d’imagerie de l’unité d’imagerie et commencez l’imagerie en accéléré de l’activité d’essaimage. Après l’imagerie en temps réel, la dynamique d’essaimage des bactéries peut être analysée à l’aide d’une analyse d’image standard telle que l’image J.