Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiology
0 vues • 2:35 min • September 26th, 2025
Prenez une plaque multi-puits contenant un milieu gélosé pré-repéré avec des bactéries ARNi, avec ou sans insert spécifique au gène ciblant un gène de C. elegans .
Grainez des vers synchronisés de stade L1 dans les puits et incubez-les pour permettre de se nourrir des bactéries ARNi.
L’insert produit un ARN interférent qui cible des gènes spécifiques du ver, générant un phénotype d’inactivation spécifique au gène.
Ajoutez un tampon dans les puits et remettez doucement les vers en suspension.
Transférez la suspension dans une plaque à puits profond et laissez les vers se déposer par gravité.
Retirez le surnageant en conservant un peu de tampon.
Lavez les vers avec un tampon, puis jetez le surnageant en laissant une petite quantité de tampon.
Ensuite, prenez une plaque de dosage multi-puits contenant des bactéries pathogènes.
Distribuez un nombre défini de vers témoins et renversants dans leurs puits respectifs pour permettre les interactions hôte-pathogène. Les bactéries pathogènes sécrètent des composés qui induisent la mortalité des vers.
Comparez la mortalité des vers pour évaluer l’effet de l’inactivation spécifique d’un gène sur la survie des vers.
Ajouter un millilitre de S Basal par puits d’une plaque de 24 puits contenant 300 vers par puits. Agitez doucement les vers en secouant la plaque, puis transférez les vers dans une plaque vide et stérile de 24 puits profonds.
Laissez les vers s’installer gravitationnellement, environ cinq minutes. Aspirez le surnageant en laissant environ un millilitre par puits, puis ajoutez 7 millilitres de S Basal dans chaque puits. Répétez le lavage deux fois de plus, puis après le lavage final, aspirez tout sauf environ 400 microlitres de surnageant.
Après avoir pipeté les bactéries dans des plaques de 384 puits pour éviter la famine, à l’aide de la fonction de rééchantillonneur du trieur de vers, triez 22 vers dans chaque puits d’une plaque de 384 puits. Enfin, après le tri, ajoutez de petites molécules ou d’autres matériaux spécifiques à l’expérience.