Expression de l’opéron de luminescence chez les bactéries bioluminescentes marines

Commencer avec une souche bactérienne bioluminescente marine portant l’opéron de luminescence, qui code pour la luciférase et les enzymes nécessaires à la synthèse du substrat.

Appliquez la tension sur une plaque de gélose riche en nutriments complétée par de l’eau de mer artificielle pour imiter la salinité native et favoriser la croissance.

Incuber pour obtenir des colonies discrètes, puis isoler et inoculer une seule colonie dans un milieu liquide contenant de l’eau de mer artificielle.

Incuber avec agitation pour favoriser la croissance pendant la nuit dans la phase exponentielle.

Transférez un volume défini de la culture de nuit dans un milieu frais et incubez-le pour augmenter la densité bactérienne.

Au fur et à mesure que la population s’étend, les bactéries libèrent des auto-inducteurs, des molécules de signalisation qui s’accumulent et se diffusent dans les cellules, où elles se lient aux récepteurs intracellulaires, activant l’opéron de luminescence.

Cette activation induit l’expression de la luciférase et la biosynthèse du substrat.

La luciférase catalyse l’oxydation du substrat en émettant une lumière bleu-vert.

Surveiller la bioluminescence de la culture comme indicateur de la luminescence, de l’activation de l’opéron et de l’émission de lumière dans les bactéries marines.

Après avoir préparé le milieu selon le protocole de texte, striez les souches bioluminescentes bactériennes sur des plaques de gélose artificielle à l’eau de mer et incuberez-les à 24 à 30 degrés Celsius pendant la nuit.

Préparez une culture de nuit en inoculant 100 millilitres de milieu d’eau de mer artificielle avec une seule colonie de la plaque. Ensuite, incubez la culture à 24 à 30 degrés Celsius et 120 tr/min pendant la nuit. Le lendemain, inoculez 800 millilitres de milieu d’eau de mer artificielle avec 8 millilitres de culture de nuit.

Incuber les cellules bactériennes à 24 à 30 degrés Celsius et 120 tr/min et observez les cellules jusqu’à ce qu’elles commencent à briller.