Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiology
0 vues • 2:19 min • September 26th, 2025
Prenez des seringues contenant des bandelettes polymères sans antibiotiques et chargées d’antibiotiques.
Remplissez les seringues avec une culture métaboliquement active de bactéries pathogènes.
Incuber les seringues en agitant pour assurer une exposition bactérienne uniforme au fluide.
Pendant l’incubation, les antibiotiques de la bandelette chargée se diffusent dans le milieu et inhibent la croissance bactérienne.
Dans la seringue avec la bandelette sans antibiotique, les bactéries prolifèrent.
Prélever la suspension bactérienne de chaque seringue dans des tubes de microcentrifugation.
Transférez les aliquotes dans une plaque multipuits.
Ajoutez un mélange de réactifs contenant de la luciférine, de l’enzyme luciférase et un agent de lyse.
Incuber en secouant pour permettre la lyse bactérienne, qui libère des composants cellulaires, y compris l’ATP. L’ATP est à l’origine de la réaction luminescente médiée par la luciférase.
À l’aide d’un lecteur de microplaques, notez la luminescence.
La culture bactérienne exposée à la bandelette chargée d’antibiotiques présente une luminescence réduite par rapport à la culture non exposée aux antibiotiques.
Cette luminescence réduite confirme l’efficacité antibactérienne de la bandelette chargée d’antibiotiques.
Placez les bandelettes UHMWPE vierges et chargées de médicament dans une seringue de trois millilitres. Ensuite, aspirez la suspension bactérienne contenant du MHB dans la seringue à travers l’aiguille attachée jusqu’à la marque de 1,5 millilitre.
Placez la seringue sur un incubateur à agitation jusqu’aux points de temps indiqués de six heures, puis tous les jours jusqu’au septième jour. Après chaque point de temps indiqué, retirez la configuration de la seringue et distribuez le support dans un tube de deux millilitres. Effectuez un test de viabilité microbienne en temps réel comme décrit dans le manuscrit en utilisant 100 microlitres de suspension bactérienne.