Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiology
0 vues • 2:28 min • November 28th, 2025
Prenez une plante d’Arabidopsis dont les feuilles sont pré-inoculées avec des bactéries pour étudier les interactions plante-microbe.
Ces bactéries prolifèrent dans l’apoplaste, l’espace intercellulaire entre les cellules végétales, formant des microcolonies.
Une fois la colonisation apoplasique établie, il faut exciser les feuilles et les placer dans une seringue sans aiguille.
Ajoutez de l’eau distillée pour recouvrir le tissu.
Insérez le ventouse, puis tenez la seringue droite, tapotez-la et ajustez le déboucheur pour libérer l’air emprisonné.
Scellez la pointe avec du parafilm pour créer une chambre fermée pour l’extraction par apoplaste.
Appliquez une pression positive en poussant le déboucheur jusqu’à ce que le tissu devienne sombre, indiquant une compression et une entrée d’eau dans les espaces intercellulaires pour déloger les bactéries.
Ensuite, appliquez une pression négative en tirant le piston pour étendre la matrice tissulaire et extraire le liquide et les bactéries.
Répétez les cycles de pression pour générer des forces de cisaillement qui perturbent les microcolonies, libérant des bactéries sans endommager les tissus végétaux.
Déverrouillez la seringue et collectez le liquide apoplasique contenant des bactéries dispersées pour une analyse plus approfondie.
Quatre jours après l’inoculation, coupez soit la partie aérienne de la plante Arabidopsis , soit la feuille inoculée de la plante de haricots et placez-la dans une seringue de 20 millilitres sans aiguille.
Pour les feuilles de haricot, roulez la feuille sur elle-même, en laissant la face abaxiale vers l’extérieur. Ajoutez suffisamment d’eau distillée pour recouvrir le tissu. Ensuite, insérez le ventouse tenant la seringue en position verticale et retirez l’excès d’air et de bulles d’air à l’intérieur de la seringue en tapotant doucement le canon jusqu’à ce que tout l’air soit près de la pointe, puis, après avoir retiré l’air, couvrez la pointe du canon de la seringue avec un film de paraffine.
Appuyez maintenant doucement sur le piston pour générer une pression positive jusqu’à ce que le tissu devienne plus foncé. Ensuite, tirez sur le plongeur pour générer une pression négative. Retirez le film de paraffine et le piston et collectez le liquide contenant les bactéries extraites de l’apoplaste.