Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiology
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Prenez une microplaque remplie d’un milieu nutritif contenant du mannitol.
Inoculez chaque puits avec une bactérie productrice de cellulose et incubez dans des conditions statiques.
Lors de l’incubation, les bactéries absorbent le mannitol et le métabolisent en glucose.
Ce glucose est transporté vers des complexes de cellulose synthase intégrés dans la membrane bactérienne et se polymérise en chaînes de glucane.
Ces chaînes s’extrudent dans l’espace extracellulaire, où elles cristallisent en microfibrilles.
Les microfibrilles se regroupent en structures en forme de ruban, formant une matrice nanocellulose tridimensionnelle.
À mesure que plus de nanocellulose est produite, elle s’accumule à l’interface air-liquide, s’épaississant en pellicules gélatineuses moulées selon la forme du puits.
Prélever les pellicules, puis les incuber dans une solution alcaline pour lyser les cellules bactériennes, puis retirer le milieu résiduel.
Rincez les pellicules à plusieurs reprises avec de l’eau pour éliminer toute solution alcaline restante. Conservez les pellicules dans de l’eau pour éviter la déshydratation. Ensuite, stériliser à la vapeur pour assurer leur stérilité en vue des applications ultérieures.
Transférez deux millilitres du milieu de culture liquide dans chaque puits d’une plaque de culture tissulaire à 24 puits. Prenez deux colonies avec une aiguille inoculante provenant des boîtes de Petri inoculées en pas à pas, et placez-les dans le premier puits de la plaque de culture tissulaire. Répétez la même procédure pour les 23 puits restants.
Incubez la plaque de culture tissulaire à 30 degrés Celsius pendant sept jours. Cela donnera un total de 24 pellicules BNC d’un diamètre de 16 mm et d’une épaisseur d’environ 2 à 3 mm. Prélever les pellicules BNC du milieu de croissance et les stériliser dans 200 millilitres de solution d’hydroxyde de sodium à un pour cent pendant une heure à 50 degrés Celsius afin d’éliminer toute trace de G. xylinus.
Jetez la solution et ajoutez 200 millilitres de solution fraîchement préparée à un pour cent d’hydroxyde de sodium. Répétez le même processus une fois de plus ou jusqu’à ce que les pellicules BNC en solution prennent une apparence translucide. Rincez les pellicules BNC à l’eau trois fois, puis conservez-les dans de l’eau de haute pureté à température ambiante.
Assurez-vous que les pellicules BNC sont complètement immergées dans l’eau et ne sont pas laissées sécher à aucun moment. Ensuite, faites autoclaver les pellicules BNC à 121 degrés Celsius pendant 20 minutes.