Imagerie en direct des interactions hôte-pathogène chez des embryons de poisson-zèbre infectés par Mycobacterium abcessus

Commençons par des embryons de poisson-zèbre transgéniques, transparents et anesthésiés, exprimant des macrophages marqués par fluorescence.

Les embryons sont pré-injectés dans le muscle de la queue avec une souche rugueuse de Mycobacterium abcessus marquée par fluorescence pour induire une infection localisée.

L’absence de glycopeptidolipides de surface dans ces bactéries favorise leur agrégation.

Immobiliser les embryons dans de l’agarose à point de fusion bas et orienter pour exposer le site d’infection.

Une fois l’agarose solidifiée, ajoutez de l’eau pour poissons contenant un agent anesthésiant pour maintenir l’anesthésie et prévenir la déshydratation.

Surveiller l’infection en temps réel via une microscopie à fluorescence.

Après infection, les macrophages endogènes migrent vers les bactéries et phagocitent les cellules individuelles.

Cependant, certaines bactéries forment des cordons — des agrégats extracellulaires allongés qui se répliquent, se propagent et résistent à la phagocytose, provoquant la mort des cellules hôtes et l’infiltration immunitaire.

Malgré cela, les cellules immunitaires ne parviennent pas à éliminer les cordons, ce qui permet aux bactéries et aux cellules hôtes mortes de s’accumuler et de former un abcès.

Cela révèle que le cordon est un M. Stratégie d’évasion immunitaire des abcès .

Pour l’imagerie vivante de l’infection par M. abcessus , montez des embryons anesthésiés par tricaine dans de l’agarose à faible point de fusion à 1 % dans une boîte de Petri à fond de verre de 35 millimètres pour un microscope inversé ou sur une lame de dépression de cavité unique pour une microscopie confocale verticale. Orientez l’embryon à la position souhaitée et couvrez l’agarose solidifiée d’eau de poisson contenant de la tricaïne. Enfin, utilisez un microscope à fluorescence avec un objectif 10X ou un microscope confocal à fluorescence avec des objectifs 40X ou 63X pour l’acquisition séquentielle de fluorescence et l’imagerie par transmission de l’embryon.