Évaluation du rôle de l’immunité de l’hôte dans l’infection mycobactérienne à l’aide d’un modèle de poisson-zèbre

Prenons le poisson-zèbre sauvage anesthésié et le poisson-zèbre immunodéprimé dépourvu de lymphocytes.

Placez chaque côté ventral du poisson vers le haut dans une fente taillée dans une éponge humide pour maintenir la viabilité.

Injecter Mycobacterium marinum dans la cavité abdominale pour établir une infection systémique modélisant la tuberculose humaine.

Après l’injection, transférez les poissons dans l’eau fraîche de l’aquarium pour la récupération et surveillez-les.

Chez les poissons sauvages, une réponse inflammatoire forme un granulome composé de bactéries, de macrophages infectés et de lymphocytes. Le granulome contient la bactérie, empêchant leur propagation.

Les lymphocytes sécrètent des cytokines qui renforcent la fonction antimicrobienne des macrophages, permettant ainsi la destruction bactérienne.

Chez les poissons immunodéprimés, le granulome ne possède pas de lymphocytes. En conséquence, les macrophages restent partiellement activés, permettant aux bactéries de survivre, de se répliquer et de se propager, entraînant la mortalité des poissons.

Générez un graphique de survie. La forte mortalité chez les poissons immunodéprimés met en lumière le rôle des lymphocytes dans le contrôle des infections.

D’abord, pipettez une gouttelette de 5 microlitres de la solution bactérienne diluée sur un morceau de film de paraffine. Ensuite, tirez la gouttelette dans une aiguille d’insuline de calibre 30.

Utilisez un poisson âgé de cinq à huit mois pour cette expérience, l’un étant un poisson sauvage et l’autre un poisson mutant en chiffons. Placez ces poissons côté ventral vers le haut dans les fentes d’un morceau de plastique mousseux humide. Injectez l’aiguille d’insuline entre les nageoires pelviennes à un angle de 45 degrés.

Gardez l’aiguille ouverte vers le haut pour vous assurer que toute l’ouverture est à l’intérieur de la cavité abdominale. Ensuite, injectez lentement la solution bactérienne. Ensuite, retirez soigneusement l’aiguille et transférez immédiatement les poissons dans un aquarium de récupération rempli d’eau fraîche.

Prélève des échantillons de l’aliquote bactérienne utilisée toutes les 15 minutes sur des plaques 7H10. Incubez ces échantillons à 29 degrés Celsius pendant cinq jours pour vérifier la dose d’infection. Vérifiez régulièrement l’état de santé des poissons, en veillant à euthanasier tout poisson présentant des symptômes d’infection en les incubant dans de l’eau contenant plus de 0,02 % d’ester éthylique à acide 3-aminobenzoïque.