Développement de boules de neurones à l’aide d’une technique de culture de gouttes suspendues

Commencez par une suspension unicellulaire de cellules progénitrices neuronales embryonnaires de souris dans un milieu neurobasal.

Le milieu contient des nutriments essentiels au maintien de la viabilité cellulaire.

Distribuez de petites gouttes de cette suspension cellulaire sur le couvercle d’une boîte de culture non adhésive, en veillant à ce qu’elles soient espacées.

Retournez le couvercle, ce qui entraînera la formation de gouttes suspendues.

Placez le couvercle au-dessus du plat contenant un tampon pour établir un environnement humide qui empêche l’évaporation du fluide et l’incubation.

À l’intérieur des gouttes suspendues, la tension superficielle du liquide maintient la forme de la goutte.

Ce confinement de forme restreint les cellules à un espace limité sans s’étendre.

De plus, les forces gravitationnelles à l’intérieur des gouttes dirigent les cellules vers la région inférieure.

Au fur et à mesure que les cellules progénitrices neuronales entrent en contact plus étroit, elles s’agrègent spontanément pour former une structure tridimensionnelle connue sous le nom de boule de neurones.

Pour préparer des boules de neurones, ajustez la densité cellulaire dans cette suspension cellulaire à 1 million de cellules par millilitre à l’aide d’un milieu NGB. Ajoutez 7 millilitres de PBS dans la partie inférieure des plats de culture. Cultivez les neurones corticaux sous forme de gouttes suspendues de 10 microlitres contenant 10 000 cellules par goutte à l’intérieur des paupières supérieures des boîtes de culture de 10 centimètres. Conservez les plats dans un incubateur pendant trois jours à 37 degrés Celsius avec 5 % de CO₂ dans des conditions humidifiées pour permettre la formation de boules de neurones.