Encyclopédie des expériences JoVE
Neuroscience
0 vues • 2:26 min • July 8th, 2025
Prenons l’exemple de neurones induits par l’homme, ou iN, cultivés sur une matrice extracellulaire.
Retirez le milieu et ajoutez des enzymes digestives qui perturbent la matrice, dissociant les cellules.
Transférez les iN dans un tube. Centrifuger la suspension et jeter le surnageant contenant les enzymes.
Remettre les iN en suspension dans un milieu de co-culture et les transférer sur une culture de cellules précurseurs d’oligodendrocytes induits, ou iOPC.
Les iOPC sont des précurseurs des oligodendrocytes qui forment des gaines de myéline autour des axones des neurones.
Lors de l’incubation, les iOPC forment des connexions synaptiques avec les iN. Les facteurs trophiques libérés par les iOPC et les facteurs de croissance dans le milieu favorisent la maturation des iN en neurones, présentant une augmentation des processus cellulaires qui forment des connexions synaptiques avec d’autres neurones.
L’activité électrique des neurones matures et des facteurs de croissance dans le milieu induit la maturation des iOPC en oligodendrocytes.
Les oligodendrocytes étendent les processus cellulaires, formant des gaines de myéline autour des axones neuronaux.
La co-culture établie est prête à être analysée.
Le jour 14, mettre en plaque les iOPC à une densité de 1 x 105 cellules par puits dans une plaque de 24 puits dans un milieu de différenciation OPC. Le lendemain, détachez les neurones humains induits avec une solution de détachement cellulaire. Ajoutez des neurones sur les OPC cultivés, en plaquant à la densité d’assise de 2 x 105 cellules par puits. Utilisez un milieu de co-culture contenant un milieu A neurobasal, un supplément de 2 % de B-27 et 100 nanogrammes par millilitre de triiodothyronine T3. Changez de support le lendemain, puis tous les deux jours. Si les OPC prolifèrent trop rapidement et atteignent leur confluence en moins de trois jours, ajoutez 2 à 5 micromolaires d’Ara-C.