Encyclopédie des expériences JoVE
Neuroscience
0 vues • 2:08 min • July 8th, 2025
Dans une plaque de culture, enduire une lamelle de polyornithine, un polymère chargé positivement, et incuber.
La polyornithine forme une couche semblable à un maillage qui aide les cellules chargées négativement à adhérer à la lamelle.
Retirez la solution et lavez les lamelles avec une solution saline tamponnée pour éliminer la polyornithine non liée.
Ajoutez une solution contenant une protéine de matrice extracellulaire appelée laminine et incubez.
La laminine forme une matrice sur la lamelle recouverte de polyornithine, améliorant ainsi la fixation des cellules.
Jetez la solution et prélevez un petit nombre de cellules souches neurales en suspension dans un milieu sans facteur de croissance.
Ajoutez cette culture à faible densité sur la lamelle préparée dans un mouvement de rotation lent pour répartir uniformément les cellules.
Initialement, la privation de facteur de croissance favorise la division cellulaire.
Au fil du temps, les cellules souches se différencient en neurones à longues projections
Finalement, les neurones produisent des structures ressemblant à des épines sur leurs projections, comme les neurones pyramidaux corticaux.
Pour préparer des cultures neuronales, placez des lamelles en verre dans des boîtes de culture à six puits et ajoutez de la polyornithine. Incuber une nuit sous une hotte à flux. Le lendemain, utilisez DPBS pour laver les lamelles trois fois et ajoutez de la laminine. Incuber sous une hotte à flux pendant au moins 10 heures.
Préparez un milieu de culture contenant les composants suivants. Ensuite, utilisez le milieu pour plaquer et répartir les cellules souches neurales ou NSC à une densité de 50 000 cellules par centimètre carré, en pipetant avec des mouvements de rotation lents afin de réduire l’agrégation de cellules.