Étude du postpotentiel dépolarisant prolongé (PDA) dans les photorécepteurs de la drosophile

Fixez une mouche drosophile aux yeux blancs à un support dans une arène d’enregistrement.

Placez une source de lumière près de la mouche.

Implantez l’électrode de terre dans le dos de la mouche.

Insérez l’électrode d’enregistrement dans la périphérie externe de l’œil de la mouche, près des cellules photoréceptrices rétiniennes contenant un photopigment.

Adaptez brièvement la mouche à l’obscurité. Cela convertit la métarhodopsine, la forme activée par la lumière du photopigment, en rhodopsine, sa forme inactive.

Appliquez une impulsion lumineuse orange de haute intensité. Cela convertit toute métarhodopsine restante en rhodopsine.

Ensuite, appliquez des impulsions de lumière bleue. La lumière bleue convertit la rhodopsine en métarhodopsine, initiant une cascade de signalisation et ouvrant des canaux ioniques spécifiques.

Cela induit un afflux continu d’ions positifs et une dépolarisation soutenue, même après l’élimination de la lumière bleue - le postpotentiel de dépolarisation prolongée, ou PDA, enregistré par l’électrode.

Maintenant, réappliquez les impulsions lumineuses orange pour convertir la métarhodopsine en rhodopsine.

Cela arrête la cascade de signalisation, termine la PDA et repolarise la membrane photoréceptrice.

Placez le porte-mouches dans une cage de Faraday sombre sur un bloc magnétique et assurez-vous que la mouche se trouve à environ cinq millimètres de l’extrémité du guide de lumière. Placez l’électrode d’enregistrement au-dessus de l’œil de la mouche et l’électrode de terre sur le haut du dos de la mouche à l’aide des micromanipulateurs. Ensuite, insérez l’électrode de terre à l’arrière de la mouche à l’aide des micromanipulateurs.

Insérez l’électrode d’enregistrement dans la périphérie extérieure de l’œil de la mouche, de préférence à l’aide des micromanipulateurs. Fermez la cage de Faraday et éteignez les lumières de la pièce pour permettre l’adaptation à l’obscurité pendant cinq minutes. Entrez les paramètres, à partir d’une durée d’impulsion de 500 mètres par seconde, d’un intervalle d’impulsion de 60 secondes et d’un nombre d’impulsions réglé sur six.

Pour mesurer le PDA, réglez le générateur d’impulsions de fréquence principale en mode Train. Ensuite, donnez une impulsion lumineuse de 5 secondes d’intensité maximale à l’aide d’un filtre orange. Vérifiez la réponse en tension. Remplacez le filtre orange par un filtre bleu à large bande et donnez trois impulsions lumineuses de 5 secondes à l’intensité maximale. Vérifiez la réponse en tension.

Attendez au moins 60 secondes dans l’obscurité. Remplacez le filtre bleu par le filtre orange précédent. Ensuite, donnez deux impulsions lumineuses de 5 secondes à 60 secondes d’intervalle. Vérifiez la réponse en tension.