Encyclopédie des expériences JoVE
Neuroscience
0 vues • 2:53 min • July 8th, 2025
Sécurisez une préparation du tronc cérébral et de la moelle épinière d’un rongeur nouveau-né dans une chambre d’enregistrement avec un flux d’aCSF oxygéné. Retirez le tissu fin recouvrant la préparation.
Le réseau neuronal du tronc cérébral génère une activité électrique rythmique, appelée rafale inspiratoire, transmise par les motoneurones de la quatrième racine nerveuse ventrale de la moelle épinière, ou C4, pour contrôler la respiration.
Placez une pipette d’enregistrement près de la racine nerveuse et utilisez la succion pour aspirer la racine à l’intérieur, formant ainsi un joint.
Les propriétés intrinsèques des neurones du tronc cérébral provoquent un afflux de sodium, dépolarisant la membrane et générant un potentiel d’action, suivi d’un écoulement de potassium pour la repolarisation.
L’hyperpolarisation qui s’ensuit empêche les nouveaux potentiels d’action jusqu’à ce que l’ATPase sodium-potassium utilise l’ATP pour restaurer le potentiel membranaire.
Les potentiels d’action se propagent à la racine nerveuse sous forme de rafales rythmiques.
Écoulez un aLCR privé d’oxygène pour perturber la production d’ATP et altérer la fonction de l’ATPase, retardant les potentiels d’action et diminuant les rafales rythmiques.
Le retour à l’aCSF oxygéné permet de récupérer le nombre de rafales rythmiques.
Dans cette procédure, placez le tissu nerveux dans la chambre d’enregistrement avec sa face ventrale vers le haut. Fixez-le avec des broches dans la partie la plus basse de la moelle épinière et la partie la plus rostrale du tronc cérébral. Après cela, retirez la membrane arachnoïdienne, qui est un tissu mince recouvrant la surface du tissu nerveux. Attention à ne pas enlever la pie-mère et les vaisseaux sanguins du tissu nerveux. Ensuite, remplissez l’électrode avec de l’ACSF.
À l’aide d’un micromanipulateur, placez soigneusement l’électrode près de la quatrième racine ventrale. Aspirez doucement la radicelle nerveuse à l’aide de la seringue. Ensuite, placez l’électrode avec la radicelle nerveuse contre la moelle épinière. Par la suite, enregistrer les activités électrophysiologiques générées par le tissu nerveux dans des conditions normoxiques pendant au moins 20 minutes pour déterminer les paramètres de base de la préparation.
Changez la solution de perfusion de l’ACSF à bulles de carbogène au stimulus d’hypoxie ACSF, et enregistrez pendant 15 minutes. Après cela, remettez la solution de perfusion à l’ACSF standard à bulles de carbogène et enregistrez pendant au moins 15 minutes supplémentaires avant de terminer l’enregistrement.