Encyclopédie des expériences JoVE
Neuroscience
0 vues • 3:06 min • August 7th, 2025
Prenez un tube de microcentrifugation contenant du facteur de croissance nerveuse ou NGF, une protéine neurotrophique, et de la protamine, une protéine porteuse chargée positivement.
Complexes de protamine avec le NGF via des interactions électrostatiques qui facilitent l’encapsulation et empêchent la dégradation.
Dans un flacon en verre, ajoutez de l’éthanol contenant des excipients lipidiques qui imitent la composition lipidique des lipoprotéines de haute densité ou HDL pour la formation de nanoparticules.
Mélanger avec de l’éthanol supplémentaire pour une dispersion uniforme. Évaporer l’éthanol sous azote pour former une fine pellicule lipidique.
Ajoutez de l’eau ultrapure et homogénéisez à grande vitesse pour permettre l’auto-assemblage en nanoparticules prototypes imitant le HDL.
Introduire le complexe NGF-protamine dans les nanoparticules et incuber en remuant pour favoriser l’encapsulation du NGF-protamine tout en préservant leur bioactivité.
Refroidissez la suspension pour stabiliser les nanoparticules, puis ajoutez l’apolipoprotéine A-I, la principale protéine structurelle du HDL, et continuez à agiter pour intégrer la protéine dans la structure des nanoparticules.
Ces nanoparticules chargées de NGF imitant le HDL sont maintenant prêtes pour des études plus approfondies.
Pour commencer, mélangez 10 microlitres de NGF avec 10 microlitres de protamine USP dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre, et laissez reposer pendant 10 minutes à température ambiante pour former le complexe. Ensuite, ajoutez 59 microlitres de phosphatidylcholine et 11 microlitres de sphingomyéline dans un flacon en verre.
Ajoutez également 4 microlitres de phosphatidylsérine, 15 microlitres d’oléate de cholestérol et 45 microlitres de succinate de polyéthylène glycol de tocophéryle. Mélangez et évaporez l’éthanol sous un léger jet d’azote pendant environ cinq minutes. Tous les excipients doivent former une fine pellicule huileuse au fond du flacon en verre.
Ajoutez 1 millilitre d’eau ultrapure dans le flacon et homogénéisez à 9 500 tr/min pendant 5 minutes à température ambiante pour former le prototype de nanoparticules ou NP. Ensuite, ajoutez le complexe préparé aux NP prototypes. Incuber la suspension à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes, en remuant, à l’aide d’une petite barre d’agitation dans le flacon en verre.
Refroidissez les MP en les remuant à température ambiante pendant encore 30 minutes. Après refroidissement, ajoutez 106 microlitres d’apolipoprotéine A-I et remuez à température ambiante pendant la nuit pour former le HDL NGF final imitant les NP.