Name: Test immunochimique validé pour la détermination complète du récepteur 2 du facteur de croissance épidermique humain libéré et lié aux cellules (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Apprenez une technique ELISA sandwich validée pour quantifier précisément la protéine HER2 libérée et liée aux cellules. Cette méthode utilise des anticorps monoclonaux innovants et s'applique aux échantillons sanguins et tissulaires pour le diagnostic.

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1. Culture de cellules cancéreuses humaines
<ol><li>Cultiver les lignées MDA-MB-231, SK-BR-3 et SK-OV-3 dans le milieu modifié de Dulbecco’s Eagle contenant 4,5 g/L de ᴅ-glucose (DMEM-HG), complété par 2 mM ʟ-glutamine et 10 % (v/v) de FBS inactivé par la chaleur. Incuber les cultures à 37 °C dans une atmosphère humidifiée à 5 % de CO2.</li>
	<li>Lorsque la culture atteint ~80 % de confluence, détacher les cellules par trypsinisation et les rassembler dans des tubes coniques séparés de 15 ml.</li>
	<li>Comptez les cellules à l’aide d’un compteur automatique de cellules et de cellules d’ensemencement pour l’expérience dans des plaques de 12 puits à une densité de 3 × 105 cellules /puits dans 1 mL de milieu de croissance. Incuber les cultures à 37 °C dans une atmosphère humidifiée à 5 % de CO2. REMARQUE : Semez un puits à chaque point de l’expérience. Le milieu de post-culture et les lysats cellulaires seront utilisés pour une analyse plus approfondie.</li>
</ol>2. Prélèvement et préparation des échantillons
<ol><li>À partir de la culture de 24 heures, prélever le milieu de culture dans un puits de chaque lignée cellulaire dans un tube de 1,5 mL.</li>
	<li>Centrifuger les échantillons prélevés à 10 000 × g pendant 10 min à 4 °C. Transférez le surnageant dans un nouveau tube et conservez-le à -20 °C pour déterminer davantage le niveau de HER2 ECD sécrété.</li>
	<li>Lavez les cellules restantes sur la plaque avec 1 ml de PBS froid, aspirez doucement et jetez le PBS.</li>
	<li>Ajouter 200 μL de tampon RIPA (complété par 1 % d’inhibiteur de protéase) dans chaque puits et incuber pendant 5 min. Racler les cellules avec le racleur cellulaire et mélanger par pipetage plusieurs fois pour homogéner le lysat.</li>
	<li>Prélever les cellules lysées dans un nouveau tube et aspirer lentement dans une seringue de 2 ml à l’aide d’une aiguille (G21 / 0,8 mm × 40 mm). Répétez l’étape d’aspiration 5 à 10 fois pour désintégrer davantage les cellules.</li>
	<li>Centrifuger les échantillons prélevés à 10 000 x g pendant 10 min à 4 °C. Transférez le surnageant dans un nouveau tube et stockez-le à -20 °C pour une détermination plus poussée de la fraction liée aux cellules de la protéine HER2.</li>
	<li>Répétez la collecte du milieu de culture et du matériel cellulaire, en suivant les étapes de préparation pour les points temporels restants - 48 h et 72 h de culture.</li>
</ol>3. Réalisation d’un ELISA sandwich pour la détermination de HER2
<ol><li>Préparez les tampons.<ol><li>Tampon d’enrobage : Préparez une solution de NaHCO3 0,1 M en dissolvant 0,42 g de NaHCO3 dans 50 ml d’eau distillée et mélangez soigneusement. Ajustez le pH à 9,6 avec 3 M de NaOH.</li>
		<li>Tampon de blocage : Préparez du lait de vache écrémé à 5 % (NFDM) dans du PBS en ajoutant 0,5 g de lait en poudre à 10 ml de PBS et mélangez soigneusement.</li>
		<li>Tampon de lavage : Préparez une solution saline tamponnée au phosphate avec du Tween 20 (PBST) en ajoutant 0,5 mL de Tween-20 à 0,05 % à 1000 mL de PBS et mélangez (évitez de mousser excessivement).</li>
	</ol></li>
	<li>Biotinylate l’anticorps détectant.<ol><li>Biotinylate 50-200 μg de détection d’anticorps anti-HER2 (clone 70.21.73.67) à l’aide d’un kit d’étiquetage de biotine commercial selon les instructions du fabricant. REMARQUE : La fiabilité et la répétabilité du procédé de biotinylation sont basées sur la mesure de la concentration protéique finale de l’anticorps résultant et sur la comparaison du produit d’un lot à l’autre.</li>
	</ol></li>
	<li>Enduire l’assiette.<ol><li>Diluer l’anticorps capteur anti-HER2 (clone 70.27.58) à la concentration de 1 μg/mL dans le tampon d’enrobage. Pour enrober une plaque, utilisez 6,5 mL de la solution d’anticorps de capture.</li>
		<li>À l’aide d’une pipette multicanaux, ajouter 100 μL de la solution d’anticorps de capture (préparée à l’étape 3.3.1) dans chaque puits d’une plaque ELISA à 96 puits. REMARQUE : Évitez les puits les plus extérieurs de la plaque (par exemple, A1, H12) pour réduire la variabilité causée par l’effet de bord. Les puits les plus extérieurs doivent être remplis d’eau distillée pour assurer des conditions de réaction stables.</li>
		<li>Recouvrez la plaque d’un film d’étanchéité.</li>
		<li>Incuber la plaque pendant la nuit (N/H) à 4 °C.</li>
		<li>Après l’incubation O/N, placez la plaque à température ambiante (RT) sur un agitateur de microplaques horizontal (20-30 tr/min avec un angle d’inclinaison de 4°-6°) pendant 1 h.</li>
		<li>À l’aide d’un laveur de microplaques, aspirer la solution de revêtement et laver la plaque trois fois avec un tampon de lavage (3 x 300 μL de PBST par puits).</li>
	</ol></li>
	<li>Bloquez la plaque.<ol><li>À l’aide d’une pipette multicanaux, ajouter 100 μL de tampon de blocage (5 % NFDM en PBS) dans chaque puits enrobé pour bloquer les sites de liaison non spécifiques.</li>
		<li>Recouvrez la plaque d’un film d’étanchéité.</li>
		<li>Incuber la plaque pendant 1 h à 37 °C dans une chambre d’humidité.</li>
		<li>À l’aide d’un laveur de microplaques, aspirer la solution de revêtement et laver la plaque trois fois avec un tampon de lavage (3 x 300 μL de PBST par puits).</li>
	</ol></li>
	<li>Préparez une courbe d’étalonnage et une commande positive (Figure 2).<ol><li>Préparer la solution étalon de travail de l’antigène HER2 en ajoutant 2 μL de solution mère de 1 mg/mL à 1998 μL de PBS pour obtenir une concentration de HER2 de 0,001 mg/mL (1000 ng/mL).</li>
		<li>Diluer la solution étalon de travail (WSS) en ajoutant 200 μL de la solution à 1800 μL de PBS pour obtenir la solution étalon 1 (STD 1).</li>
		<li>Préparer les six étalons suivants (STD 2-STD 7) par dilutions en série de STD 1 dans le PBS (Figure 2).<ol><li>IST 2 : Ajouter 500 μL de STD 1 à 500 μL de PBS et bien mélanger pour préparer 50 ng/mL.</li>
			<li>IST 3 : Ajouter 500 μL de STD 2 à 500 μL de PBS et bien mélanger pour préparer 25 ng/mL.</li>
			<li>IST 4 : Ajouter 500 μL de STD 3 à 500 μL de PBS et bien mélanger pour préparer 12,5 ng/mL.</li>
			<li>STD 5 : Ajouter 500 μL de STD 4 à 500 μL de PBS et bien mélanger pour préparer 6,25 ng/mL.</li>
			<li>NORME 6 : Ajouter 500 μL de STD 5 à 500 μL de PBS et bien mélanger pour préparer 3,125 ng/mL.</li>
			<li>NORME 7 : Ajouter 500 μL de STD 6 à 500 μL de PBS et bien mélanger pour préparer 1,5625 ng/mL.</li>
			<li>NORME 8 : Ajouter 500 μL de PBS pour préparer 0 ng/mL.</li>
		</ol></li>
		<li>Contrôle positif : Diluer la MST 1 en ajoutant 100 μL de la solution de la STD 1 à 900 μL de PBS pour obtenir une solution de HER2 à une concentration protéique de 10 ng/mL.</li>
	</ol></li>
	<li>Préparer des échantillons pour les expériences de pointe et de récupération.<ol><li>Préparez les échantillons de matrice (PBS, lysats cellulaires et milieu de culture) enrichis avec la concentration connue de la protéine HER2. Diluer les lysats cellulaires à l’échelle 1:2000 en ajoutant 2,5 μL de lysat cellulaire approprié à 5 mL de PBS pour obtenir une matrice d’échantillon avec un niveau HER2 inférieur à la LD de la méthode.</li>
		<li>Utilisez WSS (1000 ng/mL) et STD1 (100 ng/mL) pour dépister les échantillons de matrice.</li>
		<li>Pour chaque matrice, préparez 6 échantillons à des concentrations de 0, 2, 5, 10, 30 et 50 ng/mL.</li>
		<li>Pour préparer 0 ng/mL, ajoutez 400 μL de PBS/milieu de culture/lysat cellulaire.</li>
		<li>Pour préparer 2 ng/mL, ajoutez 8 μL de STD1 à 392 μL de PBS/milieu de culture/lysat cellulaire et mélangez soigneusement.</li>
		<li>Pour préparer 5 ng/mL, ajoutez 20 μL de STD1 à 380 μL de PBS/milieu de culture/lysat cellulaire et mélangez soigneusement.</li>
		<li>Pour préparer 10 ng/mL, ajoutez 4 μL de WSS à 396 μL de PBS/milieu de culture/lysat cellulaire et mélangez soigneusement.</li>
		<li>Pour préparer 30 ng/mL, ajoutez 12 μL de WSS à 388 μL de PBS/milieu de culture/lysat cellulaire et mélangez soigneusement.</li>
		<li>Pour préparer 50 ng/mL, ajoutez 20 μL de WSS à 380 μL de PBS/milieu de culture/lysat cellulaire et mélangez soigneusement.</li>
	</ol></li>
	<li>Ajoutez l’échantillon, le blanc et la norme.<ol><li>À l’aide d’une pipette monocanal, ajoutez 100 μL d’étalons, de blanc (PBS) et d’échantillons testés (lysats cellulaires et milieu de culture) dans les puits appropriés. REMARQUE : Il est conseillé d’exécuter chaque échantillon en trois exemplaires.</li>
		<li>Recouvrez la plaque d’un film d’étanchéité.</li>
		<li>Incuber la plaque pendant 1 h à 37 °C dans une chambre d’humidité.</li>
		<li>À l’aide d’un laveur de microplaques, aspirer la solution de revêtement et laver la plaque trois fois avec un tampon de lavage (3 x 300 μL de PBST par puits).</li>
	</ol></li>
	<li>Détecter la liaison des anticorps.<ol><li>Diluer l’anticorps de détection biotinylé (clone 70.21.73.67) dans du PBS jusqu’à une concentration de travail de 1 μg/mL. Pour une plaque, utilisez 6,5 ml de solution de détection d’anticorps.</li>
		<li>À l’aide d’une pipette multicanaux, ajoutez 100 μL de la solution de détection d’anticorps dans chaque puits.</li>
		<li>Recouvrez la plaque d’un film d’étanchéité.</li>
		<li>Incuber la plaque pendant 1 h à 37 °C dans une chambre d’humidité.</li>
		<li>À l’aide d’un laveur de microplaques, aspirez la solution de revêtement et lavez la plaque trois fois avec un tampon de lavage (3 x 300 μL de PBST par puits).</li>
	</ol></li>
	<li>Ajouter le conjugué Avidin-HRP.<ol><li>Diluer le conjugué Avidin-HRP 1:40 000 disponible dans le commerce en ajoutant 1 μL de conjugué enzymatique à 40 mL de PBST.</li>
		<li>À l’aide d’une pipette multicanaux, ajoutez 100 μL du conjugué dilué dans chaque puits.</li>
		<li>Recouvrez la plaque d’un film d’étanchéité.</li>
		<li>Incuber la plaque pendant 1 h à 37 °C dans une chambre d’humidité.</li>
		<li>À l’aide d’un laveur de microplaques, aspirer la solution de revêtement et laver la plaque trois fois avec un tampon de lavage (3 x 300 μL de PBST par puits).</li>
	</ol></li>
	<li>Réaction colorimétrique<ol><li>À l’aide d’une pipette multicanaux, ajoutez 100 μL de substrat de 3,3′,5,5′-tétraméthylbenzidine (TMB) dans chaque puits.</li>
		<li>Recouvrez la plaque d’un film d’étanchéité.</li>
		<li>Incuber la plaque pendant 1 à 5 minutes à 37 °C à l’abri de la lumière et surveiller l’évolution de la couleur.</li>
		<li>Lorsque la couleur atteint le niveau attendu, ajoutez 100 μL de solution d’arrêt pour terminer la réaction. REMARQUE : Le niveau attendu correspond à une couleur bleue intense dans les puits contenant des échantillons à forte concentration de l’analyte.</li>
	</ol></li>
	<li>Acquérir et analyser des données.<ol><li>Mesurez l’absorbance à 450 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques.</li>
		<li>À l’aide d’une courbe d’étalonnage à 4 paramètres, calculez la concentration de l’échantillon à l’aide de l’équation de la courbe.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68204/68204fig1v5.jpg"> Figure 1 : Schéma de principe du flux de travail ELISA sandwich anti-HER2 développé. Aperçu des étapes clés de la procédure ELISA sandwich. Il s’agit notamment des étapes critiques (mises en évidence par un cadre rouge) telles que l’enrobage de la plaque avec l’anticorps anti-HER2 de capture 70.27.58, l’ajout d’échantillons (étalons de courbe, échantillons vierges et expérimentaux des lysats cellulaires ou du milieu de culture) et la liaison de l’anticorps anti-HER2 de détection 70.21.73.67. Le test se termine par la détection du signal et l’analyse des données, où le signal colorimétrique est quantifié à l’aide d’un lecteur de microplaques pour déterminer la concentration de l’antigène cible. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68204/68204fig1v5large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68204/68204fig02.jpg"> Figure 2 : Schéma de préparation des solutions étalons de la courbe d’étalonnage. Des dilutions en série de la protéine recombinante HER2 sont préparées pour générer une courbe d’étalonnage dans une plage de concentration de 1,56 à 100 ng/mL (flacons STD 1-STD 7). De plus, l’échantillon témoin négatif sans la protéine HER2 est inclus (STD 8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68204/68204fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

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<li>NinioMany, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR125a+induces+HER2+expression+and+sensitivity+to+trastuzumab+in+triplenegative+breast+cancer+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">miR125a induces HER2 expression and sensitivity to trastuzumab in triplenegative breast cancer lines.</a> Front Oncol. 10, 191(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kit d’étiquetage à la biotine-NH2</td><td>Abnova</td><td>KA0003</td><td></td></tr><tr><td>Lait en poudre, faible en gras</td><td>Roth</td><td>T145.1</td><td></td></tr><tr><td>Lames de comptage de cellules pour compteur de cellules TC10/TC20, double chambre</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire</td><td>Biologix</td><td>07-6012</td><td></td></tr><tr><td>Grattoirs cellulaires</td><td>Biologix</td><td>70-1250</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Ohaus</td><td>30130868</td><td></td></tr><tr><td>Classe II Enceinte de Sécurité Biologique - Telstar Bio II Advance 6</td><td>Telstar</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Plaques transparentes à fond plat à 96 puits</td><td>Thermo Fisher</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Culture Safe Incubateurs CO2 - Touch 190S</td><td>Leec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxy&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM - haute glycémie</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0822</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de plaques ELISA</td><td>BioTek</td><td>800TSUVI</td><td></td></tr><tr><td>FBS Standard, sérum fœtal bovin</td><td>PAN Biotech</td><td>P30-19375</td><td></td></tr><tr><td>Séchoir de laboratoire à circulation forcée</td><td>BINDER</td><td>9090-0018</td><td></td></tr><tr><td>HRP-Avidin</td><td>Thermo Fisher</td><td>43-4423</td><td></td></tr><tr><td>Protéine humaine Her2 / ErbB2, Fc Tag, qualité supérieure</td><td>AcroBIOSYSTEMS</td><td>HER2-H5253</td><td></td></tr><tr><td>Immunowash Microplate Washer</td><td>Bio-Rad</td><td>170-7009</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (clone 70.21.73.67)</td><td>SDS Optic</td><td>BIO-ABH-2</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (clone 70.27.58)</td><td>SDS Optic</td><td>BIO-ABH-1</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 Lignée cellulaire</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>POCH</td><td>810530115</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>POCH</td><td>BA0981118</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de protéase Cocktail</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Fair PBS</td><td>Roth</td><td>1111.2</td><td></td></tr><tr><td>SK-BR-3 [SKBR3] Lignée cellulaire</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td></td></tr><tr><td>SK-OV-3 [SKOV-3 ; SKOV3] Lignée cellulaire</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’arrêt 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210900</td><td></td></tr><tr><td>TC20 Compteur de cellules automatisé</td><td>Substrat Bio-rad</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>TMB 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210902</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Ohaus</td><td>30392117</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur de mouvement d’onde</td><td>Ohaus</td><td>30391968</td><td></td></tr></tbody></table>

test immunochimique validé pour la détermination complète du récepteur 2 du facteur de croissance épidermique humain libéré et lié aux cellules

Validated Immunochemical Assay for Comprehensive Determination of the Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Released from and Bound to Cells

Validation ELISA sandwich Le test nouvellement mis au point nécessite une procédure de validation. Les paramètres de validation importants comprennent la linéarité, la précision et les limites de détection, c’est-à-dire la limite inférieure de détection (LLOD) et la limite supérieure de détection. Dans l’article précédent, nous avons effectué une validation approfondie de la méthode. La linéarité ELISA a été testée en utilisant les échantillons simulés pour des concentrations faibles (2, 5, 10 ng/mL),...

Test immunochimique validé pour la détermination complète du récepteur 2 du facteur de croissance épidermique humain libéré et lié aux cellules

Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is a well-established cancer marker. It became a very successful diagnostic and therapeutic target, ...

validated-immunochemical-assay-for-comprehensive-determination-human

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Le test de libération du chrome, un dosage commun pour détecter l'activité des cellules T cytotoxiques, présente plusieurs limitations. En utilisant des cellules T CD8 spécifiques de l'antigène et la ligne de tumeur du cancer du sein humain, SKBR3, dans le présent article, une approche à base d'impédance a été examiné pour la capacité de détecter la destruction des cellules.

Détermination de l&#39;activité cytotoxique CD8 spécifiques optimale des cellules T humaines Her2neu en comparant les Cr51 Essai de libération dans le système de xCELLigence

Au cours des dernières années, des essais à base de cellules vivantes ont été utilisées avec succès pour détecter des anticorps contre les antigènes de surface et de conformation. Ici, nous décrivons une méthode utilisant un écoulement à haut débit cytométrie permettant l'analyse de grandes cohortes de patients. Détection de nouveaux anticorps permettra d'améliorer le diagnostic et le traitement des troubles du système immunitaire à médiation.

Haut-débit cytométrie en flux test cellulaire pour détecter les anticorps de la N-méthyl-D-aspartate Receptor ou récepteur de la dopamine-2 dans le sérum humain

Ce protocole décrit le marquage du récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) sur les cellules fibroblastiques COS7, et la microscopie corrélative ultérieure à la lumière et électronique de cellules entières à l’état hydraté. L’étiquette contenait des points quantiques fluorescents. Le protocole peut être utilisé pour étudier la stœchiométrie de l’EGFR au niveau de la molécule unique.

L&#39;étude de la Stœchiométrie Epidermal Growth Factor Receptor dans des cellules intactes en utilisant la microscopie corrélative

Nous décrivons un test biologique simple, basée sur des cellules pour la détection, la quantification et le suivi de l'activité des membres de la famille du facteur de croissance endothélial vasculaire des ligands. L'essai utilise des récepteurs chimères exprimés dans une lignée cellulaire dépendant du facteur de fournir une évaluation semi-quantitative ou quantitative de la liaison au récepteur et la réticulation par le ligand.

Un bioessai simple pour l&#39;évaluation des facteurs de croissance endothélial vasculaire

La focalisation isoélectrique capillaire est une technique de base d’anticorps, ultrasensible, haut débit, ce qui permet une caractérisation détaillée de protéines et leurs isoformes de très petits échantillons biologiques. Ce qui suit décrit un protocole pour la détection et la quantification des protéines spécifiques et leurs isoformes de manière automatisée et robotisée.

Détection très sensible et Quantitative des protéines et leurs isoformes par isoélectrofocalisation capillaire méthode

Anticorps qui se fixent à des récepteurs sur la surface de la cellule cible peuvent conférer conformation et altérations clusters. Ces changements dynamiques ont des implications pour caractériser le développement des médicaments dans les cellules cibles. Ce protocole utilise la microscopie confocale et spectroscopie de corrélation d’image par le biais de ImageJ/Fidji pour quantifier l’ampleur du récepteur clustering sur la surface de la cellule.

Agrégation de récepteur de Surface cellulaire microscopie confocale révèle par spectroscopie de corrélation d’Image

Nous présentons ici une méthode de cytométrie de flux basé sur la cellule afin de détecter les anticorps neutralisants ou autres facteurs qui interfèrent avec l’absorption cellulaire des thérapies de remplacement enzymatique dans une matrice humaine, comme le liquide céphalo-rachidien (LCR) ou de sérum humain.

Détection des anticorps qui neutralisent l’assimilation de thérapies de remplacement de Enzyme avec un Cell-based Assay

Nous décrivons un système d'essai in vitro quantitatif de cytolyse en temps réel pour évaluer la puissance des cellules De T de récepteur d'antigène chimérique ciblant les cellules tumorales liquides et pleines. Ce protocole peut être étendu pour évaluer d'autres cellules effectrices immunitaires, ainsi que des traitements combinés.

Un analyse de puissance en temps réel pour les cellules T de récepteur d'antigène chimérique ciblant les cellules cancéreuses solides et hématologiques

Une étape nécessaire dans le développement d’aptamères anticancéreux est de tester sa liaison à la cible. Nous démontrons un test basé sur la cytométrie en flux pour étudier cette liaison, en soulignant l’importance d’inclure un aptamère témoin négatif et des cellules cancéreuses positives ou négatives pour cette protéine particulière.

Essai de liaison à une protéine de surface cellulaire basé sur la cytométrie en flux pour évaluer la sélectivité et la spécificité d’un aptamère anticancéreux

Ici, nous présentons un protocole pour un test de cytotoxicité à médiation cellulaire (ADCC) dépendant des anticorps à l’aide d’un kit de dosage biologique ADCC. Cette méthode offre un outil précieux pour élucider le mécanisme de l’ADCC et évaluer le potentiel thérapeutique des anticorps dans l’immunothérapie du cancer.

Évaluation de la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps dans les cellules cancéreuses à l’aide d’un essai biologique de prototoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps

Apprenez une technique ELISA sandwich validée pour quantifier précisément la protéine HER2 libérée et liée aux cellules. Cette méthode utilise des anticorps monoclonaux innovants et s'applique aux échantillons sanguins et tissulaires pour le diagnostic.

Test immunochimique validé pour la détermination complète du récepteur 2 du facteur de croissance épidermique humain libéré et lié aux cellules (Vidéo) | JoVE Journal

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