Name: Optimisation rapide d’un système inductible par la lumière pour contrôler l’expression génique de mammifères (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Découvrez une méthode de haut débit pour optimiser l'expression génique induite par la lumière dans les cellules HEK293T. Cette approche utilise l'outil optogénétique LACE et un réseau LED imprimé en 3D pour améliorer le contrôle de l'expression génique chez les mammifères.

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<table><tbody><tr><td>Tubes microcentrifugeuses de 1,5 mL</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>Réservoirs de réactifs de 10 mL</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques de 10 mL</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mu ; Embouts du filtre en L</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL&nbsp ; Tubes centrifugeuses haute performance, bouchon plat</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>Mesureur de puissance optique 1931-C</td><td>Newport</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques de 2 mL</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 & mu ; Embouts du filtre en L</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu ; Embouts du filtre en L</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>Tubes centrifugeuses haute performance de 50 mL, bouchon plat</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>Plaques à fond en V à 96 puits</td><td>PLAQUES DE MARQUE</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, ampoule LED rouge</td><td>Ampoules Bluex</td><td>N/A</td><td>Source lumineuse rouge</td></tr><tr><td>Logiciel IDE Arduino</td><td>Arduino</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Armoire de biosécurité, classe II</td><td>NuAire</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hémocytomètre à ligne claire</td><td>Hausser Scientific</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>Diapositives de comptage cellulaire</td><td>BioRad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire à 96 puits, plaque inférieure en verre #1,5H</td><td>Cellvis</td><td>P96-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert Software</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX Prêts à utiliser les fluorosphères QC quotidiennes</td><td>Beckman Coulter</td><td>C65719</td><td>4 & deg ; C</td></tr><tr><td>Cytomètre de flux CytoFLEX-S (4 canaux violet, 2 bleus, 4 jaune-vert, 3 rouges)</td><td>Beckman Coulter</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>Sauve sésale tamponnée phosphate de Dulbecco, sans calicum, sans magnésium</td><td>Fisher Scientific</td><td>21600069</td><td>Température ambiante</td></tr><tr><td>Centrifugeuse Eppendorf 5804</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp ; 022622501</td><td>Étape centrifugeuse à plaque en V</td></tr><tr><td>Centrifugeuse Eppendorf 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, 8 canaux, volume variable, 30 - 300 & mu ; L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, mono-canal, volume variable, 100 - 1000 & mu ; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, mono-canal, volume variable, 2 - 20 et mu ; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, mono-canal, volume variable, 20 - 200 & mu ; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Ruban d’étiquetage polyvalent de laboratoire</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Gibco, poudre, glycémie élevée</td><td>Fisher Scientific</td><td>12100061</td><td>4 & deg ; C</td></tr><tr><td>Solution bleue Gibco Trypan, 0,4 %</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-250-061</td><td>Température ambiante</td></tr><tr><td>Gibco Value Heat Inactivated FBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>A5256901</td><td>-20 & degrés C</td></tr><tr><td>Gibco, Trypsine-EDTA (0,05 %), avec EDTA, origine animale, 1X, Phénol rouge, 500 mL</td><td>Gibco</td><td>25300062</td><td>-20 & degrés C</td></tr><tr><td>HEK293T Cellules</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 &deg ; C, azote liquide</td></tr><tr><td>Marqueurs de laboratoire, Micronova</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>Lampe de bureau en métal</td><td>Designs simples</td><td>N/A</td><td>Lampe pour la lumière rouge</td></tr><tr><td>OptoPlate-96</td><td>LABmaker</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>XP de l’aide aux pipets</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Plasmide : CIBN-gRNA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 & degrés C</td></tr><tr><td>Plasmide : CMV-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 & degrés C</td></tr><tr><td>Plasmide : CRY2-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 & degrés C</td></tr><tr><td>Réactif de transfection in vitro à l’ADN PolyJet</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1536117</td><td>4 & deg ; C</td></tr><tr><td>Flasque de culture cellulaire T-75</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur CO<sous><2/sous> chemise d’eau</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

optimisation rapide d’un système inductible par la lumière pour contrôler l’expression génique de mammifères

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Optimisation rapide d’un système inductible par la lumière pour contrôler l’expression génique de mammifères

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Cette vidéo démontre le système d’expression génique de la tétracycline, ou Tet-On, dans un modèle murin. En présence de doxycycline, un dérivé de la tétracycline, le système Tet-On constitué de la protéine transactivatrice inverse contrôlée par la tétracycline s’active et exprime le gène d’intérêt.

Expression génique inductible basée sur le système régulable Tet-On in vivo : un système d’expression génique induit par la tétracycline pour l’activation de la transcription du gène cible dans un modèle murin

Ce protocole décrit une procédure expérimentale pour la construction rapide des facteurs de transcription artificiels (atfs) avec les journalistes de la GFP apparentées et la quantification de la capacité des carburants de remplacement à stimuler l'expression de la GFP par cytométrie de flux.

Synthèse rapide et le dépistage de facteurs de transcription activés chimiquement avec Reporters base GFP

La méthode décrite ici est utilisée pour induire la cascade de signalisation apoptotique à des étapes définies afin de disséquer l’activité d’une protéine effectrice bactérienne anti-apoptotique. Cette méthode peut également être utilisée pour l’expression inductible de protéines pro-apoptotiques ou toxiques, ou pour disséquer l’interférence avec d’autres voies de signalisation.

L&#39;application d&#39;un système d&#39;expression inductible pour étudier les interférences de facteurs de virulence bactérienne avec signalisation intracellulaire

Ce protocole décrit une stratégie opto-génétique pour moduler l'activité de la protéine kinase activée par mitogène (MAPK) pendant la différenciation cellulaire et le développement embryonnaire de Xenopus . Cette méthode permet l'activation réversible de la voie de signalisation MAPK dans la culture de cellules de mammifères et dans les organismes vivants multicellulaires, comme les embryons de Xenopus , avec une résolution spatiale et temporelle élevée.

Modulation réversible médiée par la lumière du pathogène protéinique Kinase activé par Mitogen pendant la différenciation cellulaire et<em&gt; Xenopus</em&gt; Développement embryonnaire

Nous présentons ici un protocole visant à analyser le transfert de cellule à cellule de renseignements oscillatoires par optogenetic contrôle et suivi de l’expression génique en direct. Cette approche constitue une plate-forme unique pour tester une importance fonctionnelle des programmes d’expression de gène dynamique dans les systèmes multicellulaires.

Une méthode Optogenetic pour contrôler et analyser les profils d’Expression génique dans les Interactions cellule-cellule

Ce protocole décrit les étapes nécessaires pour générer un modèle de système dans lequel la transcription d’un gène endogène d’intérêt peut être conditionnellement contrôlée dans les animaux vivants ou de cellules à l’aide d’activator, renforcée lac répresseur et tet .

Application in vivo de la système de télécommande pour la Manipulation d’Expression des gènes endogènes

Le contrôle fiable des cellules de mammifères sensibles à la lumière nécessite la normalisation des méthodes optogénétiques. Pour atteindre cet objectif, cette étude décrit un pipeline de construction de circuits géniques, d’ingénierie cellulaire, de fonctionnement de l’équipement optogénétique et de tests de vérification pour normaliser l’étude de l’expression des gènes induite par la lumière en utilisant un circuit génique optogénétique à rétroaction négative comme étude de cas.

Ingénierie et contrôle fiables des circuits génétiques optogénétiques stables dans les cellules de mammifères

L’optogénétique est un outil puissant avec de nombreuses applications. Ce protocole montre comment obtenir une expression génique inductible à la lumière chez les embryons de poisson-zèbre en utilisant le système TAEL/C120 sensible à la lumière bleue.

Expression de GFP induite par la lumière dans des embryons de poisson-zèbre à l’aide du système optogénétique TAEL/C120

La bioluminescence-lumière émise par une enzyme luciférase oxydant un substrat de petite molécule, une luciférine-peut être exploitée pour activer des protéines photosensorielles, ajoutant ainsi une autre dimension à la stimulation lumineuse et permettant la manipulation d’une multitude de fonctions médiées par la lumière dans les cellules à travers les échelles temporelles et spatiales.

Optogénétique bioluminescente 2.0 : Exploiter la bioluminescence pour activer les protéines photosensorielles in vitro et in vivo

Le contrôle optogénétique du métabolisme microbien offre un contrôle dynamique flexible des processus de fermentation. Le protocole montre ici comment mettre en place des fermentations régulées par la lumière bleue pour la production de produits chimiques et de protéines à différentes échelles volumétriques.

Fermentations contrôlées par la lumière pour la production de produits chimiques microbiens et de protéines

Ce protocole décrit l’application d’un domaine d’interrupteur allostérique activé par la lumière bleue (LightR) pour un contrôle spatio-temporel réversible de l’activité protéique. En utilisant la tyrosine kinase Src comme modèle, cette étude propose un protocole élaboré pour développer et caractériser la Src régulée par la lumière (LightR-Src). Il démontre la polyvalence de cette approche dans toutes les classes d’enzymes.

Contrôle spatio-temporel de l’activité des protéines par la régulation allostérique optogénétique

Découvrez une méthode de haut débit pour optimiser l'expression génique induite par la lumière dans les cellules HEK293T. Cette approche utilise l'outil optogénétique LACE et un réseau LED imprimé en 3D pour améliorer le contrôle de l'expression génique chez les mammifères.

Optimisation rapide d’un système inductible par la lumière pour contrôler l’expression génique de mammifères

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