השתלת אבות עצביים שמקורם בתאי גזע לפרוסות קליפת המוח האנושיות

התחל בתרבית דבקה של תאי אב עצביים שמקורם בתאי גזע המוכנים להתמיינות לנוירונים בקליפת המוח.

הסר את המדיום, ואז הוסף אנזים כדי לשבש את המטריצה החוץ-תאית ולנתק את התאים.

השתמש במעכב כדי לנטרל את האנזים, ולאחר מכן הוסף מדיום טרי.

העבירו את התרחיף לתוך צינור, צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט כדי לבודד את התאים.

השעו מחדש את התאים במטריצת קרום מרתף כדי להקל על ההשתלה ברקמת המוח, ואז העמיסו אותם לתוך צינור נימי קר.

קח פרוסה קליפת המוח האנושית למכלול טרנסוול המכיל מדיום.

הסר חלק מהמדיום, ואז הזריק טיפות של תרחיף התאים לרקמה.

דגירה כדי לאפשר למטריצה להתמצק.

הוסיפו מדיום כדי לטבול את הרקמה, ואז דגרו כדי לאפשר לתאי אב להתמיין לנוירונים, להרחיב את הנוירונים שלהם וליצור סינפסות עם נוירונים בקליפת המוח.

הפרוסה בקליפת המוח מוכנה כעת לניתוח.

הסר את המדיה מבקבוק תרבית התאים. ביום השביעי של ההתמיינות, נתק תאי GFP-lt-NES בעלי הכנה קליפת המוח על ידי הוספת 500 מיקרוליטר טריפסין ודגירה למשך 5 עד 10 דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, הוסף נפח שווה של מעכב הטריפסין ואחריו חמישה מיליליטר של מדיום DDM. השעו מחדש את התאים, העבירו בעדינות את תרחיף התאים לצינור של 15 מיליליטר וצנטריפוגה למשך חמש דקות ב -300 גרם. בינתיים, העבירו את הצלחת המכילה את הרקמה האנושית מהאינקובטור למכסה המנוע, והוציאו שני מיליליטר מדיה מהחלק העליון של התוספת. בסוף הצנטריפוגה, הסר את הסופרנטנט, השהה מחדש את התאים במטריצת קרום קרה, טהורה ומרתף, והעביר את התרחיף לצינור קטן יותר.

אוספים את מתלה התאים לנימים מזכוכית קרה המחוברת לפטמת גומי ליניקה. הזרקו את תרחיף התאים כטיפות זעירות על ידי דקירת פרוסת הרקמה היבשה למחצה באתרים שונים. הניחו לג'ל להתמצק בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.

לאחר מכן, העבירו את הצלחת מהחממה בחזרה למכסה המנוע והוסיפו בזהירות שני מיליליטר של מדיום קליפת המוח הבוגר האנושי לחלק העליון של התוספת כדי להטביע את הרקמה לחלוטין.