תרבית ובידוד זני חיידקים פתוגניים יוצרי קפסולות

התחל עם זני חיידקים פתוגניים שגודלו על צלחות אגר נפרדות.

כל זן נושא מוטציות שונות בגנים האחראים לייצור קפסולה, שכבת פוליסכריד מגנה.

מעבירים מושבות בודדות מהצלחות לצינורות נפרדים המכילים מדיום נוזלי עשיר בחומרים מזינים ודוגרים.

במהלך הדגירה, החיידקים נכנסים לשלב הצמיחה האקספוננציאלי ומבטאים את הגנים המייצרים כמוסה.

מוטציות בגנים אלה גורמות לשינויים בייצור הקפסולה, ויוצרות תאים ללא קפסולה, קפסולה חלשה ובעלי קפסולות כבדות.

העבירו את התרביות והצנטריפוגות כדי לגלול את התאים.

תאים ללא קפסולות ובעלי קפסולות חלשות יוצרים כדורים צפופים, בעוד שצללים בעלי קפסולות כבדות,

בשל שכבת הקפסולה המיובשת שלהם, יוצרים גלולה פחות צפופה.

הסירו בזהירות את הסופרנטנט כדי למנוע אובדן של התאים הכבדים.

הוסף חוצץ, צנטריפוגה שוב, והשליך את הסופרנטנט כדי לחסל את המדיום השיורי.

השעו מחדש את התאים במאגר כדי לייצב את החיידקים מבלי לקדם צמיחה נוספת, ובכך לשמר את מבנה הקפסולה.

בחר מושבה בודדת מצלחת ציר עם לולאה סטרילית, וחסן 10 מיליליטר של מרק מתאים.

דגרו על התרבות בן לילה. לאחר מכן העבירו את התרבית לצינור של 15 מיליליטר, וצנטריפוגה. לאחר מכן, השליכו את הסופרנטנט ותלו מחדש את הגלולה בשני מיליליטר PBS.

חזור על הצנטריפוגה והשליך את הסופרנטנט שהתקבל. לאחר מכן השעו מחדש את הגלולה בשני מיליליטר PBS.