הפרדת חיידקים לפי כמות כמוסה באמצעות שיפוע צפיפות לא רציף

התחל עם צינור המכיל שיפוע צפיפות לא רציף מוגדר מראש, שהוכן באמצעות חלקיקי סיליקה קולואידיים לא רעילים המצופים בפוליוויניל פירולידון.

השיפוע מורכב משלוש שכבות לא חופפות המסודרות בסדר הגדלת הצפיפות מלמעלה למטה.

קחו לדוגמה ספריית מוטנטים של טרנספוזונים חיידקיים, תרחיף מאוגד של זני חיידקים עם מוטציות אקראיות הנגרמות על ידי טרנספוזון.

תת-קבוצה של מוטציות אלה משבשת גנים המווסתים את הקפסולה, שכבה רב-סוכרית המקיפה את דופן התא החיידקי, וכתוצאה מכך זנים עם כמויות קפסולה משתנות.

הוסף את ספריית החיידקים לחלק העליון של השיפוע לאט מאוד, מבלי לערבב את הממשק.

צנטריפוגה את הצינור במהירות מתונה.

השיפוע מקל על נדידה דיפרנציאלית של חיידקים על סמך כמויות הקפסולה שלהם.

זנים היפר-קפסולתיים, בהיותם פחות צפופים בשל שכבת הפוליסכריד המיובשת שלהם, מתמקמים ליד החלק העליון.

זנים בעלי קפסולות חלשות מתיישבים באמצע, וזנים צפופים יותר שאינם קפסולות נודדים לתחתית.

זני החיידקים המופרדים מוכנים לניתוח במורד הזרם.

הוסף בזהירות 600 מיקרוליטר מהתאים המוכנים לראש השיפוע בצינור. לאחר מכן הנח את הצינור במתאם צינור, ושקול את הצינור עם המתאם כדי להבטיח איזון. לאחר מכן, הנח את מתאם הצינור ברוטור זווית קבועה בתוך צנטריפוגה על ספסל, וצנטריפוגה את הצינור למשך 30 דקות ב-3,000 גרם.

לבסוף, לאחר צנטריפוגה, הסר את הצינור בזהירות, הנח אותו במתלה וצלם את התוצאות.